中华微生物学和免疫学杂志
中華微生物學和免疫學雜誌
중화미생물학화면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
2006年
9期
841-845
,共5页
侯伟%倪勤%沃健儿%李敏伟%刘克洲
侯偉%倪勤%沃健兒%李敏偉%劉剋洲
후위%예근%옥건인%리민위%류극주
10-23 DNAzyme%乙型肝炎病毒(HBV)%X基因%增强绿色荧光蛋白(EGFP)
10-23 DNAzyme%乙型肝炎病毒(HBV)%X基因%增彊綠色熒光蛋白(EGFP)
10-23 DNAzyme%을형간염병독(HBV)%X기인%증강록색형광단백(EGFP)
目的 以增强绿色荧光蛋白(EGFP)作为报告分子,探讨10-23 DNAzyme对乙型肝炎病毒(HBV)X基因表达的抑制作用.方法 设计并合成3种能针对HBV X基因的特异性10-23DNAzymes,分别命名为DrzHBVX-7、DrzHBVX-8和DrzHBVX-9,能分别特异地识别HBV X基因开放阅读框(ORF)的A1376UG.将内有HBV X全基因片段(不含终止密码)的融合表达质粒pHBx-EGFP与10-23DNAzyme共转染AD293细胞作为共转染组,用pHBx-EGFP单独转染AD293细胞作为对照组,分别用荧光显微镜观察并用流式细胞仪检测细胞荧光强度,同时用半定量一步法RT-PCR分析融合荧光蛋白HBx-EGFP mRNA的相对表达量.结果 各共转染组细胞荧光蛋白HBx-EGFP的表达均明显弱于对照组(P＜0.05);各试验组HBx-EGFP mRNA的相对表达量与对照组比较也均明显减少(P＜0.05);各共转染组细胞之间HBx-EGFP的表达及HBx-EGFP mRNA的相对表达量差异无统计学意义(P＞0.05).结论 10-23 DNAzyme对HBV X基因的表达有特异抑制作用,在HBV感染的基因治疗中会有潜在的应用价值.
目的 以增彊綠色熒光蛋白(EGFP)作為報告分子,探討10-23 DNAzyme對乙型肝炎病毒(HBV)X基因錶達的抑製作用.方法 設計併閤成3種能針對HBV X基因的特異性10-23DNAzymes,分彆命名為DrzHBVX-7、DrzHBVX-8和DrzHBVX-9,能分彆特異地識彆HBV X基因開放閱讀框(ORF)的A1376UG.將內有HBV X全基因片段(不含終止密碼)的融閤錶達質粒pHBx-EGFP與10-23DNAzyme共轉染AD293細胞作為共轉染組,用pHBx-EGFP單獨轉染AD293細胞作為對照組,分彆用熒光顯微鏡觀察併用流式細胞儀檢測細胞熒光彊度,同時用半定量一步法RT-PCR分析融閤熒光蛋白HBx-EGFP mRNA的相對錶達量.結果 各共轉染組細胞熒光蛋白HBx-EGFP的錶達均明顯弱于對照組(P＜0.05);各試驗組HBx-EGFP mRNA的相對錶達量與對照組比較也均明顯減少(P＜0.05);各共轉染組細胞之間HBx-EGFP的錶達及HBx-EGFP mRNA的相對錶達量差異無統計學意義(P＞0.05).結論 10-23 DNAzyme對HBV X基因的錶達有特異抑製作用,在HBV感染的基因治療中會有潛在的應用價值.
목적 이증강록색형광단백(EGFP)작위보고분자,탐토10-23 DNAzyme대을형간염병독(HBV)X기인표체적억제작용.방법 설계병합성3충능침대HBV X기인적특이성10-23DNAzymes,분별명명위DrzHBVX-7、DrzHBVX-8화DrzHBVX-9,능분별특이지식별HBV X기인개방열독광(ORF)적A1376UG.장내유HBV X전기인편단(불함종지밀마)적융합표체질립pHBx-EGFP여10-23DNAzyme공전염AD293세포작위공전염조,용pHBx-EGFP단독전염AD293세포작위대조조,분별용형광현미경관찰병용류식세포의검측세포형광강도,동시용반정량일보법RT-PCR분석융합형광단백HBx-EGFP mRNA적상대표체량.결과 각공전염조세포형광단백HBx-EGFP적표체균명현약우대조조(P＜0.05);각시험조HBx-EGFP mRNA적상대표체량여대조조비교야균명현감소(P＜0.05);각공전염조세포지간HBx-EGFP적표체급HBx-EGFP mRNA적상대표체량차이무통계학의의(P＞0.05).결론 10-23 DNAzyme대HBV X기인적표체유특이억제작용,재HBV감염적기인치료중회유잠재적응용개치.
