中华创伤骨科杂志
中華創傷骨科雜誌
중화창상골과잡지
CHINESE JOURNAL OF ORTHOPAEDIC TRAUMA
2006年
2期
148-152
,共5页
邹德波%周东生%王永会%王来城%武兴国%黄涛
鄒德波%週東生%王永會%王來城%武興國%黃濤
추덕파%주동생%왕영회%왕래성%무흥국%황도
人骨形态发生蛋白-2%骨髓基质干细胞%基因转染%表达
人骨形態髮生蛋白-2%骨髓基質榦細胞%基因轉染%錶達
인골형태발생단백-2%골수기질간세포%기인전염%표체
目的探讨含有人骨形态发生蛋白-2(hBMP-2)cDNA的真核表达载体在兔骨髓基质干细胞(MSCs)中的转录及表达情况,为进一步进行多基因转染MSCs复合纳米仿生骨治疗骨缺损实验提供材料.方法用电穿孔方法将真核表达载体pIRES2-EGFP-hBMP2转染至兔MSCs中,荧光显微镜及流式细胞学检查观察转染效果、检测转染效率,定量RT-PCR方法观察hBMP-2 cDNA在兔MSCs中的转录情况,免疫组织化学及western blot方法检测hBMP-2蛋白表达情况,ALP活性定量测定检测hBMP-2蛋白功能.结果电穿孔方法将重组质粒转染至兔MSCs中,荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白表达,流式细胞仪检测转染效率为(42.7±2.1)%,转染24 h后定量RT-PCR方法检测到hBMP-2 cDNA在兔MSCs中的转录片断,免疫组织化学观察到hBMP-2蛋白呈强阳性表达,western blot方法可见18 KD hBMP-2蛋白条带,转染组细胞ALP活性明显提高(P＞0.05).结论pIRES2-EGFP-hBMP2通过电穿孔方法导入兔MSCs,并在其中有效表达,发挥生物学作用.
目的探討含有人骨形態髮生蛋白-2(hBMP-2)cDNA的真覈錶達載體在兔骨髓基質榦細胞(MSCs)中的轉錄及錶達情況,為進一步進行多基因轉染MSCs複閤納米倣生骨治療骨缺損實驗提供材料.方法用電穿孔方法將真覈錶達載體pIRES2-EGFP-hBMP2轉染至兔MSCs中,熒光顯微鏡及流式細胞學檢查觀察轉染效果、檢測轉染效率,定量RT-PCR方法觀察hBMP-2 cDNA在兔MSCs中的轉錄情況,免疫組織化學及western blot方法檢測hBMP-2蛋白錶達情況,ALP活性定量測定檢測hBMP-2蛋白功能.結果電穿孔方法將重組質粒轉染至兔MSCs中,熒光顯微鏡下觀察到綠色熒光蛋白錶達,流式細胞儀檢測轉染效率為(42.7±2.1)%,轉染24 h後定量RT-PCR方法檢測到hBMP-2 cDNA在兔MSCs中的轉錄片斷,免疫組織化學觀察到hBMP-2蛋白呈彊暘性錶達,western blot方法可見18 KD hBMP-2蛋白條帶,轉染組細胞ALP活性明顯提高(P＞0.05).結論pIRES2-EGFP-hBMP2通過電穿孔方法導入兔MSCs,併在其中有效錶達,髮揮生物學作用.
목적탐토함유인골형태발생단백-2(hBMP-2)cDNA적진핵표체재체재토골수기질간세포(MSCs)중적전록급표체정황,위진일보진행다기인전염MSCs복합납미방생골치료골결손실험제공재료.방법용전천공방법장진핵표체재체pIRES2-EGFP-hBMP2전염지토MSCs중,형광현미경급류식세포학검사관찰전염효과、검측전염효솔,정량RT-PCR방법관찰hBMP-2 cDNA재토MSCs중적전록정황,면역조직화학급western blot방법검측hBMP-2단백표체정황,ALP활성정량측정검측hBMP-2단백공능.결과전천공방법장중조질립전염지토MSCs중,형광현미경하관찰도록색형광단백표체,류식세포의검측전염효솔위(42.7±2.1)%,전염24 h후정량RT-PCR방법검측도hBMP-2 cDNA재토MSCs중적전록편단,면역조직화학관찰도hBMP-2단백정강양성표체,western blot방법가견18 KD hBMP-2단백조대,전염조세포ALP활성명현제고(P＞0.05).결론pIRES2-EGFP-hBMP2통과전천공방법도입토MSCs,병재기중유효표체,발휘생물학작용.
