国际消化病杂志
國際消化病雜誌
국제소화병잡지
INTERNATIONAL JOURNAL OF DIGESTIVE DISEASE
2012年
3期
172-175,183
,共5页
孙璟%朱黎明%姚玮艳%涂水平%吴云林%乔敏敏%江石湖
孫璟%硃黎明%姚瑋豔%塗水平%吳雲林%喬敏敏%江石湖
손경%주려명%요위염%도수평%오운림%교민민%강석호
腺病毒载体%XAF1%肝肿瘤%构建%表达
腺病毒載體%XAF1%肝腫瘤%構建%錶達
선병독재체%XAF1%간종류%구건%표체
目的 利用携带35型腺病毒纤毛的嵌合型5型腺病毒载体系统Ad5/F35构建XAF1基因重组腺病毒,体内外感染人肝癌细胞SMMC7721并使XAF1基因有效表达.方法 将真核表达质粒pcDNA3.1-XAF1和穿梭质粒pDC316用BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切、筛选、测序获得重组穿梭质粒pDC316-XAF1.将测序正确的pDC316-XAF1和骨架质粒pBHG-fiber5/F35用Lipofectamine2000共转染HEK293细胞,进行细胞内同源重组,得到重组腺病毒Ad5/F35-XAF1.予终点稀释法测定重组腺病毒的感染滴度.用同样的方法得到携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的报告病毒Ad5/F35-EGFP.建立人肝癌细胞株SMMC7721裸鼠移植瘤模型,将Ad5/F35-XAF1和Ad5/F35-EGFP重组腺病毒分别感染人肝癌细胞株SMMC7721和瘤内注射;荧光显微镜观察EGFP在细胞和移植瘤冰冻切片中的表达;RT-PCR和Westren blot法检测XAF1的mRNA和蛋白在细胞和移植瘤组织的表达.结果 重组腺病毒Ad5/F35-EGFP感染肝癌细胞和瘤内注射后,予荧光显微镜均可见细胞和冰冻切片中呈现绿色荧光;Ad5/F35-XAF1感染肝癌细胞和瘤内注射后,XAF1mRNA和蛋白表达均显著高于对照组和报告病毒组.结论 成功构建重组腺病毒Ad5/F35-XAF1和Ad5/F35-EGFP.该腺病毒载体可携带目的 基因在人肝癌细胞株SMMC7721体内和体外进行有效表达.
目的 利用攜帶35型腺病毒纖毛的嵌閤型5型腺病毒載體繫統Ad5/F35構建XAF1基因重組腺病毒,體內外感染人肝癌細胞SMMC7721併使XAF1基因有效錶達.方法 將真覈錶達質粒pcDNA3.1-XAF1和穿梭質粒pDC316用BamHⅠ和EcoRⅠ雙酶切、篩選、測序穫得重組穿梭質粒pDC316-XAF1.將測序正確的pDC316-XAF1和骨架質粒pBHG-fiber5/F35用Lipofectamine2000共轉染HEK293細胞,進行細胞內同源重組,得到重組腺病毒Ad5/F35-XAF1.予終點稀釋法測定重組腺病毒的感染滴度.用同樣的方法得到攜帶增彊型綠色熒光蛋白(EGFP)的報告病毒Ad5/F35-EGFP.建立人肝癌細胞株SMMC7721裸鼠移植瘤模型,將Ad5/F35-XAF1和Ad5/F35-EGFP重組腺病毒分彆感染人肝癌細胞株SMMC7721和瘤內註射;熒光顯微鏡觀察EGFP在細胞和移植瘤冰凍切片中的錶達;RT-PCR和Westren blot法檢測XAF1的mRNA和蛋白在細胞和移植瘤組織的錶達.結果 重組腺病毒Ad5/F35-EGFP感染肝癌細胞和瘤內註射後,予熒光顯微鏡均可見細胞和冰凍切片中呈現綠色熒光;Ad5/F35-XAF1感染肝癌細胞和瘤內註射後,XAF1mRNA和蛋白錶達均顯著高于對照組和報告病毒組.結論 成功構建重組腺病毒Ad5/F35-XAF1和Ad5/F35-EGFP.該腺病毒載體可攜帶目的 基因在人肝癌細胞株SMMC7721體內和體外進行有效錶達.
목적 이용휴대35형선병독섬모적감합형5형선병독재체계통Ad5/F35구건XAF1기인중조선병독,체내외감염인간암세포SMMC7721병사XAF1기인유효표체.방법 장진핵표체질립pcDNA3.1-XAF1화천사질립pDC316용BamHⅠ화EcoRⅠ쌍매절、사선、측서획득중조천사질립pDC316-XAF1.장측서정학적pDC316-XAF1화골가질립pBHG-fiber5/F35용Lipofectamine2000공전염HEK293세포,진행세포내동원중조,득도중조선병독Ad5/F35-XAF1.여종점희석법측정중조선병독적감염적도.용동양적방법득도휴대증강형록색형광단백(EGFP)적보고병독Ad5/F35-EGFP.건립인간암세포주SMMC7721라서이식류모형,장Ad5/F35-XAF1화Ad5/F35-EGFP중조선병독분별감염인간암세포주SMMC7721화류내주사;형광현미경관찰EGFP재세포화이식류빙동절편중적표체;RT-PCR화Westren blot법검측XAF1적mRNA화단백재세포화이식류조직적표체.결과 중조선병독Ad5/F35-EGFP감염간암세포화류내주사후,여형광현미경균가견세포화빙동절편중정현록색형광;Ad5/F35-XAF1감염간암세포화류내주사후,XAF1mRNA화단백표체균현저고우대조조화보고병독조.결론 성공구건중조선병독Ad5/F35-XAF1화Ad5/F35-EGFP.해선병독재체가휴대목적 기인재인간암세포주SMMC7721체내화체외진행유효표체.
