实验与检验医学
實驗與檢驗醫學
실험여검험의학
EXPERIMENTAL AND LABORATORY MEDICINE
2012年
2期
123-125,177
,共4页
徐芬%张长林%简正伟%江梅%万腊根
徐芬%張長林%簡正偉%江梅%萬臘根
서분%장장림%간정위%강매%만석근
c-kit基因%D816V突变%阳性对照
c-kit基因%D816V突變%暘性對照
c-kit기인%D816V돌변%양성대조
目的 构建含野生型c-kit基因第17号外显子片段以及含D816V突变型的重组质粒,用作检测c-kit基因D816V突变的阳性对照和阴性对照标准品.方法 通过设计定点突变的克隆引物和野生型克隆引物,以健康人外周血基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增获得突变和野生型c-kit基因17号外显子片段,将其插入pEGFP-C1载体质粒中获得重组质粒,并通过酶切和测序鉴定重组质粒,通过紫外分光光度计检测标本的浓度和纯度.结果 从健康外周血细胞基因组DNA中成功扩增得到野生型和定点突变的c-kit DNA片段,并将其插入到质粒载体pEGFP-C1中,构建的阳性和阴性对照质粒经酶切和测序鉴定与目的片段完全一致.阴性和阳性质粒标准品的浓度分别为140.1μg/ml和189.9μg/ml,其OD260/OD280值分别为1.821和1.802.结论 成功构建了含野生型和D816V突变的c-kit重组质粒,为检测c-kit基因D816V突变提供阴性和阳性对照以及质控品.
目的 構建含野生型c-kit基因第17號外顯子片段以及含D816V突變型的重組質粒,用作檢測c-kit基因D816V突變的暘性對照和陰性對照標準品.方法 通過設計定點突變的剋隆引物和野生型剋隆引物,以健康人外週血基因組DNA為模闆,採用PCR方法擴增穫得突變和野生型c-kit基因17號外顯子片段,將其插入pEGFP-C1載體質粒中穫得重組質粒,併通過酶切和測序鑒定重組質粒,通過紫外分光光度計檢測標本的濃度和純度.結果 從健康外週血細胞基因組DNA中成功擴增得到野生型和定點突變的c-kit DNA片段,併將其插入到質粒載體pEGFP-C1中,構建的暘性和陰性對照質粒經酶切和測序鑒定與目的片段完全一緻.陰性和暘性質粒標準品的濃度分彆為140.1μg/ml和189.9μg/ml,其OD260/OD280值分彆為1.821和1.802.結論 成功構建瞭含野生型和D816V突變的c-kit重組質粒,為檢測c-kit基因D816V突變提供陰性和暘性對照以及質控品.
목적 구건함야생형c-kit기인제17호외현자편단이급함D816V돌변형적중조질립,용작검측c-kit기인D816V돌변적양성대조화음성대조표준품.방법 통과설계정점돌변적극륭인물화야생형극륭인물,이건강인외주혈기인조DNA위모판,채용PCR방법확증획득돌변화야생형c-kit기인17호외현자편단,장기삽입pEGFP-C1재체질립중획득중조질립,병통과매절화측서감정중조질립,통과자외분광광도계검측표본적농도화순도.결과 종건강외주혈세포기인조DNA중성공확증득도야생형화정점돌변적c-kit DNA편단,병장기삽입도질립재체pEGFP-C1중,구건적양성화음성대조질립경매절화측서감정여목적편단완전일치.음성화양성질립표준품적농도분별위140.1μg/ml화189.9μg/ml,기OD260/OD280치분별위1.821화1.802.결론 성공구건료함야생형화D816V돌변적c-kit중조질립,위검측c-kit기인D816V돌변제공음성화양성대조이급질공품.
