细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2009年
12期
1133-1135
,共3页
闫小飞%徐阳%郑瑾%来宝长%王一理
閆小飛%徐暘%鄭瑾%來寶長%王一理
염소비%서양%정근%래보장%왕일리
HPV16%L1%单克隆抗体
HPV16%L1%單剋隆抗體
HPV16%L1%단극륭항체
目的:研制具有型特异性和构象依赖性的人乳头瘤病毒16主衣壳L1蛋白(HPV16 L1)单克隆抗体(mAb).方法:利用昆虫-杆状病毒系统表达有生物活性的HPV16 L1蛋白.非变性条件下纯化HPV16 L1蛋白,免疫6周龄雌性BALB/c小鼠.末次加强免疫后取其脾细胞与骨髓瘤Sp2/0细胞融合,应用间接ELISA筛选阳性克隆.非变性Western blot鉴定mAb的型特异性和构象依赖性,细胞免疫组化确定抗体的型特异性.间接ELISA法测定杂交瘤分泌上清及腹水中抗体效价.mAb亚类试剂盒鉴定mAb亚类.结果:获得1株稳定分泌具有型特异性和构象依赖性的HPV16 L1抗体的杂交瘤细胞株,命名为2E3.2E3杂交瘤细胞株细胞培养上清中抗体效价为1:800;小鼠腹水中抗体效价为1:12 800.亚类鉴定结果为IgG1κ.Western blot及细胞免疫组化分析结果显示,2E3 mAb具有型特异性和构象依赖性,只与非变性的HPV16 L1蛋白发生反应,不与HPV18L1、HPV58L1、HPV11L1产生交叉反应.结论:成功制备了型特异性HPV16 L1 mAb,为进一步研究HPV16 L1的抗原表位奠定了基础.
目的:研製具有型特異性和構象依賴性的人乳頭瘤病毒16主衣殼L1蛋白(HPV16 L1)單剋隆抗體(mAb).方法:利用昆蟲-桿狀病毒繫統錶達有生物活性的HPV16 L1蛋白.非變性條件下純化HPV16 L1蛋白,免疫6週齡雌性BALB/c小鼠.末次加彊免疫後取其脾細胞與骨髓瘤Sp2/0細胞融閤,應用間接ELISA篩選暘性剋隆.非變性Western blot鑒定mAb的型特異性和構象依賴性,細胞免疫組化確定抗體的型特異性.間接ELISA法測定雜交瘤分泌上清及腹水中抗體效價.mAb亞類試劑盒鑒定mAb亞類.結果:穫得1株穩定分泌具有型特異性和構象依賴性的HPV16 L1抗體的雜交瘤細胞株,命名為2E3.2E3雜交瘤細胞株細胞培養上清中抗體效價為1:800;小鼠腹水中抗體效價為1:12 800.亞類鑒定結果為IgG1κ.Western blot及細胞免疫組化分析結果顯示,2E3 mAb具有型特異性和構象依賴性,隻與非變性的HPV16 L1蛋白髮生反應,不與HPV18L1、HPV58L1、HPV11L1產生交扠反應.結論:成功製備瞭型特異性HPV16 L1 mAb,為進一步研究HPV16 L1的抗原錶位奠定瞭基礎.
목적:연제구유형특이성화구상의뢰성적인유두류병독16주의각L1단백(HPV16 L1)단극륭항체(mAb).방법:이용곤충-간상병독계통표체유생물활성적HPV16 L1단백.비변성조건하순화HPV16 L1단백,면역6주령자성BALB/c소서.말차가강면역후취기비세포여골수류Sp2/0세포융합,응용간접ELISA사선양성극륭.비변성Western blot감정mAb적형특이성화구상의뢰성,세포면역조화학정항체적형특이성.간접ELISA법측정잡교류분비상청급복수중항체효개.mAb아류시제합감정mAb아류.결과:획득1주은정분비구유형특이성화구상의뢰성적HPV16 L1항체적잡교류세포주,명명위2E3.2E3잡교류세포주세포배양상청중항체효개위1:800;소서복수중항체효개위1:12 800.아류감정결과위IgG1κ.Western blot급세포면역조화분석결과현시,2E3 mAb구유형특이성화구상의뢰성,지여비변성적HPV16 L1단백발생반응,불여HPV18L1、HPV58L1、HPV11L1산생교차반응.결론:성공제비료형특이성HPV16 L1 mAb,위진일보연구HPV16 L1적항원표위전정료기출.
