广西医科大学学报
廣西醫科大學學報
엄서의과대학학보
JOURNAL OF GUANGXI MEDICAL UNIVERSITY
2010年
6期
846-849
,共4页
石庆秋%张学荣%宋慧%班建东%韦敏%农君%陈缨
石慶鞦%張學榮%宋慧%班建東%韋敏%農君%陳纓
석경추%장학영%송혜%반건동%위민%농군%진영
蛇毒%神经生长因子%基因克隆%真核表达载体%NIH3T3细胞系
蛇毒%神經生長因子%基因剋隆%真覈錶達載體%NIH3T3細胞繫
사독%신경생장인자%기인극륭%진핵표체재체%NIH3T3세포계
目的:构建广西眼镜蛇蛇毒神经生长因子(NGF)基因的真核表达载体pcDNA3.1(一)-NGF,并在NIH3T3细胞中进行表达.方法:采用RT-PCR的方法扩增蛇毒NGF的基因片段,将目的基因、真核表达载体pcDNA3.1(一)分别酶切后回收,连接,转化而构建重组表达载体pcDNA3.1(一)-NGF,经酶切和测序对重组体进行鉴定.利用脂质体LipofectamineTM2000方法转染NIH3T3细胞,对阳性克隆裂解上清中NGF的表达用SDS-PAGE、Western-blot的方法检测.结果:重组载体经酶切、测序分析,插入的基因片段为表达蛇毒NGF的基因,NGF基因在NIH3T3细胞中获得表达.结论:成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(一)-NGF,并检测出在哺乳动物细胞NIH3T3中表达,为进一步开展NGF基因治疗神经系统的疾病奠定了实验基础.
目的:構建廣西眼鏡蛇蛇毒神經生長因子(NGF)基因的真覈錶達載體pcDNA3.1(一)-NGF,併在NIH3T3細胞中進行錶達.方法:採用RT-PCR的方法擴增蛇毒NGF的基因片段,將目的基因、真覈錶達載體pcDNA3.1(一)分彆酶切後迴收,連接,轉化而構建重組錶達載體pcDNA3.1(一)-NGF,經酶切和測序對重組體進行鑒定.利用脂質體LipofectamineTM2000方法轉染NIH3T3細胞,對暘性剋隆裂解上清中NGF的錶達用SDS-PAGE、Western-blot的方法檢測.結果:重組載體經酶切、測序分析,插入的基因片段為錶達蛇毒NGF的基因,NGF基因在NIH3T3細胞中穫得錶達.結論:成功構建瞭真覈錶達載體pcDNA3.1(一)-NGF,併檢測齣在哺乳動物細胞NIH3T3中錶達,為進一步開展NGF基因治療神經繫統的疾病奠定瞭實驗基礎.
목적:구건엄서안경사사독신경생장인자(NGF)기인적진핵표체재체pcDNA3.1(일)-NGF,병재NIH3T3세포중진행표체.방법:채용RT-PCR적방법확증사독NGF적기인편단,장목적기인、진핵표체재체pcDNA3.1(일)분별매절후회수,련접,전화이구건중조표체재체pcDNA3.1(일)-NGF,경매절화측서대중조체진행감정.이용지질체LipofectamineTM2000방법전염NIH3T3세포,대양성극륭렬해상청중NGF적표체용SDS-PAGE、Western-blot적방법검측.결과:중조재체경매절、측서분석,삽입적기인편단위표체사독NGF적기인,NGF기인재NIH3T3세포중획득표체.결론:성공구건료진핵표체재체pcDNA3.1(일)-NGF,병검측출재포유동물세포NIH3T3중표체,위진일보개전NGF기인치료신경계통적질병전정료실험기출.
