中国癌症杂志
中國癌癥雜誌
중국암증잡지
CHINA ONCOLOGY
2010年
4期
241-246
,共6页
李崴%范冬梅%程昕%师锐赞%刘荣%任思楣%王敏%杨铭
李崴%範鼕梅%程昕%師銳讚%劉榮%任思楣%王敏%楊銘
리외%범동매%정흔%사예찬%류영%임사미%왕민%양명
基因工程抗体%双功能抗体%CD3%CD19%淋巴瘤%免疫治疗
基因工程抗體%雙功能抗體%CD3%CD19%淋巴瘤%免疫治療
기인공정항체%쌍공능항체%CD3%CD19%림파류%면역치료
背景与目的:微型双功能抗体是基因工程抗体的-种形式,它具有两个抗原结合位点,可选择性募集效应细胞到靶细胞周围,介导特异性杀伤作用.本实验构建抗CD3/抗CD19微型双功能抗体(diabody)载体,表达纯化后测定其生物学活性.方法:用重叠PCR(overlap PCR)和PCR方法,构建抗CD3/抗CD19 diabody 载体,转化感受态大肠埃希菌进行原核表达.表达产物经抗His-tag亲和层析柱分离纯化,12%SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定.应用间接免疫荧光和竞争性免疫荧光结合流式细胞分析技术(PACS)检测生物学活性.结果:基因重组质粒经测序证实序列正确.抗CD3/抗CD19 diabody能够在原核表达系统中进行可溶性表达.12%SDS-PAGE显示28×103和26×103各有-条带,Western blot在28×103显示有条带,与预期相符.表达产物经纯化定量可达5 mg/L.FACS检测抗CD3/抗CD19 diabody可与CD19+ Raji细胞和CD3+ Jurkat细胞特异结合,并能竞争性抑制HIT3a和HIT19a与上述细胞的结合活性.结论:本实验成功构建了抗CD3/抗CD19 diabody,并且能够进行可溶性表达,可与CD19+ Raji细胞和CD3+ Jurkat细胞特异结合,为以后的抗体功能实验奠定了基础.
揹景與目的:微型雙功能抗體是基因工程抗體的-種形式,它具有兩箇抗原結閤位點,可選擇性募集效應細胞到靶細胞週圍,介導特異性殺傷作用.本實驗構建抗CD3/抗CD19微型雙功能抗體(diabody)載體,錶達純化後測定其生物學活性.方法:用重疊PCR(overlap PCR)和PCR方法,構建抗CD3/抗CD19 diabody 載體,轉化感受態大腸埃希菌進行原覈錶達.錶達產物經抗His-tag親和層析柱分離純化,12%SDS-PAGE電泳及Western blot鑒定.應用間接免疫熒光和競爭性免疫熒光結閤流式細胞分析技術(PACS)檢測生物學活性.結果:基因重組質粒經測序證實序列正確.抗CD3/抗CD19 diabody能夠在原覈錶達繫統中進行可溶性錶達.12%SDS-PAGE顯示28×103和26×103各有-條帶,Western blot在28×103顯示有條帶,與預期相符.錶達產物經純化定量可達5 mg/L.FACS檢測抗CD3/抗CD19 diabody可與CD19+ Raji細胞和CD3+ Jurkat細胞特異結閤,併能競爭性抑製HIT3a和HIT19a與上述細胞的結閤活性.結論:本實驗成功構建瞭抗CD3/抗CD19 diabody,併且能夠進行可溶性錶達,可與CD19+ Raji細胞和CD3+ Jurkat細胞特異結閤,為以後的抗體功能實驗奠定瞭基礎.
배경여목적:미형쌍공능항체시기인공정항체적-충형식,타구유량개항원결합위점,가선택성모집효응세포도파세포주위,개도특이성살상작용.본실험구건항CD3/항CD19미형쌍공능항체(diabody)재체,표체순화후측정기생물학활성.방법:용중첩PCR(overlap PCR)화PCR방법,구건항CD3/항CD19 diabody 재체,전화감수태대장애희균진행원핵표체.표체산물경항His-tag친화층석주분리순화,12%SDS-PAGE전영급Western blot감정.응용간접면역형광화경쟁성면역형광결합류식세포분석기술(PACS)검측생물학활성.결과:기인중조질립경측서증실서렬정학.항CD3/항CD19 diabody능구재원핵표체계통중진행가용성표체.12%SDS-PAGE현시28×103화26×103각유-조대,Western blot재28×103현시유조대,여예기상부.표체산물경순화정량가체5 mg/L.FACS검측항CD3/항CD19 diabody가여CD19+ Raji세포화CD3+ Jurkat세포특이결합,병능경쟁성억제HIT3a화HIT19a여상술세포적결합활성.결론:본실험성공구건료항CD3/항CD19 diabody,병차능구진행가용성표체,가여CD19+ Raji세포화CD3+ Jurkat세포특이결합,위이후적항체공능실험전정료기출.
