中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2008年
11期
2200-2203
,共4页
黄毕%鲍朗%钟琪%商正玲%王中平
黃畢%鮑朗%鐘琪%商正玲%王中平
황필%포랑%종기%상정령%왕중평
钩端螺旋体属%溶血素类%细胞毒性%基因,HIyX
鉤耑螺鏇體屬%溶血素類%細胞毒性%基因,HIyX
구단라선체속%용혈소류%세포독성%기인,HIyX
目的:克隆、表达HlyX基因并研究其细胞毒性效应.方法:从赖型钩端螺旋体017株全基因组中用PCR方法扩增出目的基因,双酶切构建重组质粒,转化E.coliJM109,诱导表达HlyX;将表达的目的蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,Western blotting鉴定其免疫原性;将目的蛋白纯化、复性后作用于ECV304细胞,通过检测ECV304细胞乳酸脱氢酶(LDH)和一氧化氮(NO)的释放量研究目的蛋白的细胞毒性效应.结果:扩增出1179 bp的目的基因HlyX,重组质粒经双酶切、PCR鉴定,测序结果表明重组质粒构建成功.经IPTG诱导表达的融合蛋白约64 kD,主要以包涵体的形式表达,经免疫动物得到多克隆抗体,ELISA检测效价达1:64 000;Westernblotting鉴定在目的蛋白的位置处有特异性阳性条带.经过HlyX融合蛋白作用的ECV304细胞LDH和NO释放量明显高于对照组(P＜0.01).结论:HlyX能在大肠杆菌中表达,表达的目的蛋白对细胞有毒性效应.
目的:剋隆、錶達HlyX基因併研究其細胞毒性效應.方法:從賴型鉤耑螺鏇體017株全基因組中用PCR方法擴增齣目的基因,雙酶切構建重組質粒,轉化E.coliJM109,誘導錶達HlyX;將錶達的目的蛋白免疫新西蘭大白兔,製備多剋隆抗體,Western blotting鑒定其免疫原性;將目的蛋白純化、複性後作用于ECV304細胞,通過檢測ECV304細胞乳痠脫氫酶(LDH)和一氧化氮(NO)的釋放量研究目的蛋白的細胞毒性效應.結果:擴增齣1179 bp的目的基因HlyX,重組質粒經雙酶切、PCR鑒定,測序結果錶明重組質粒構建成功.經IPTG誘導錶達的融閤蛋白約64 kD,主要以包涵體的形式錶達,經免疫動物得到多剋隆抗體,ELISA檢測效價達1:64 000;Westernblotting鑒定在目的蛋白的位置處有特異性暘性條帶.經過HlyX融閤蛋白作用的ECV304細胞LDH和NO釋放量明顯高于對照組(P＜0.01).結論:HlyX能在大腸桿菌中錶達,錶達的目的蛋白對細胞有毒性效應.
목적:극륭、표체HlyX기인병연구기세포독성효응.방법:종뢰형구단라선체017주전기인조중용PCR방법확증출목적기인,쌍매절구건중조질립,전화E.coliJM109,유도표체HlyX;장표체적목적단백면역신서란대백토,제비다극륭항체,Western blotting감정기면역원성;장목적단백순화、복성후작용우ECV304세포,통과검측ECV304세포유산탈경매(LDH)화일양화담(NO)적석방량연구목적단백적세포독성효응.결과:확증출1179 bp적목적기인HlyX,중조질립경쌍매절、PCR감정,측서결과표명중조질립구건성공.경IPTG유도표체적융합단백약64 kD,주요이포함체적형식표체,경면역동물득도다극륭항체,ELISA검측효개체1:64 000;Westernblotting감정재목적단백적위치처유특이성양성조대.경과HlyX융합단백작용적ECV304세포LDH화NO석방량명현고우대조조(P＜0.01).결론:HlyX능재대장간균중표체,표체적목적단백대세포유독성효응.
