医学研究杂志
醫學研究雜誌
의학연구잡지
JOURNAL OF MEDICAL RESEARCH
2008年
12期
36-38
,共3页
刘继峰%关翠萍%唐旭%徐田红%许爱娥
劉繼峰%關翠萍%唐旭%徐田紅%許愛娥
류계봉%관취평%당욱%서전홍%허애아
单纯疱疹病毒2型%ICP4%实时定量荧光PCR%标准曲线
單純皰疹病毒2型%ICP4%實時定量熒光PCR%標準麯線
단순포진병독2형%ICP4%실시정량형광PCR%표준곡선
目的 建立实时荧光PCR定量检测单纯疱疹病毒2型(HSV2)ICP4基因的方法.方法 依据HSV2 ICP4基因序列设计引物.PCR纯化后克隆到pMD-18T载体上进行测序,抽提重组质粒作为标准品.根据测序结果设计荧光定最PCR的引物和探针,质粒标准品10倍稀释后进行扩增,建立标准曲线,并进行灵敏度和可靠性分析.结果 测序结果显示在扩增的PCR片段中有在A-G无和T-C的无义突变.标准品101以下没有检测信号,101具有明确的检测信号,因而检测的灵敏度为10.可靠性测定结果:107-101进行10次重复Ct值的平均值分别为14.275±0.137、17.988±0.162、22.081±0.259、25.957±0.345、29.565±0.203、33.269±0.287、37.737±0.698,变异系数分别为0.965%、0.902%、1.174%、1.329%、0.686%、0.862%、1.851%.Ct值与标准品浓度的对数之间存在良好的线性关系.回归系数为0.998.结论 成功建立了HSV2 ICP4基因实时定量荧光PCR检测的方法,灵敏度高,重复性好,可用于HSV2 ICP4基因的定量分析.
目的 建立實時熒光PCR定量檢測單純皰疹病毒2型(HSV2)ICP4基因的方法.方法 依據HSV2 ICP4基因序列設計引物.PCR純化後剋隆到pMD-18T載體上進行測序,抽提重組質粒作為標準品.根據測序結果設計熒光定最PCR的引物和探針,質粒標準品10倍稀釋後進行擴增,建立標準麯線,併進行靈敏度和可靠性分析.結果 測序結果顯示在擴增的PCR片段中有在A-G無和T-C的無義突變.標準品101以下沒有檢測信號,101具有明確的檢測信號,因而檢測的靈敏度為10.可靠性測定結果:107-101進行10次重複Ct值的平均值分彆為14.275±0.137、17.988±0.162、22.081±0.259、25.957±0.345、29.565±0.203、33.269±0.287、37.737±0.698,變異繫數分彆為0.965%、0.902%、1.174%、1.329%、0.686%、0.862%、1.851%.Ct值與標準品濃度的對數之間存在良好的線性關繫.迴歸繫數為0.998.結論 成功建立瞭HSV2 ICP4基因實時定量熒光PCR檢測的方法,靈敏度高,重複性好,可用于HSV2 ICP4基因的定量分析.
목적 건립실시형광PCR정량검측단순포진병독2형(HSV2)ICP4기인적방법.방법 의거HSV2 ICP4기인서렬설계인물.PCR순화후극륭도pMD-18T재체상진행측서,추제중조질립작위표준품.근거측서결과설계형광정최PCR적인물화탐침,질립표준품10배희석후진행확증,건립표준곡선,병진행령민도화가고성분석.결과 측서결과현시재확증적PCR편단중유재A-G무화T-C적무의돌변.표준품101이하몰유검측신호,101구유명학적검측신호,인이검측적령민도위10.가고성측정결과:107-101진행10차중복Ct치적평균치분별위14.275±0.137、17.988±0.162、22.081±0.259、25.957±0.345、29.565±0.203、33.269±0.287、37.737±0.698,변이계수분별위0.965%、0.902%、1.174%、1.329%、0.686%、0.862%、1.851%.Ct치여표준품농도적대수지간존재량호적선성관계.회귀계수위0.998.결론 성공건립료HSV2 ICP4기인실시정량형광PCR검측적방법,령민도고,중복성호,가용우HSV2 ICP4기인적정량분석.
