解放军医学杂志
解放軍醫學雜誌
해방군의학잡지
MEDICAL JOURNAL OF CHINESE PEOPLE'S LIBERATION ARMY
2008年
10期
1205-1208
,共4页
李建军%潘凤%黄海辉%胡绍毅%边志衡%梁后杰
李建軍%潘鳳%黃海輝%鬍紹毅%邊誌衡%樑後傑
리건군%반봉%황해휘%호소의%변지형%량후걸
结肠肿瘤%NF-κB%多药耐药相关蛋白质类%细胞凋亡
結腸腫瘤%NF-κB%多藥耐藥相關蛋白質類%細胞凋亡
결장종류%NF-κB%다약내약상관단백질류%세포조망
目的 探讨NF-kB信号通路在结肠癌HT-29细胞多细胞耐药中的作用及可能机制.方法 采用液体重叠培养系统和常规贴壁法对HT-29细胞进行三维(3D)和单层(2D)培养.采用倒置相差显微镜、扫描电镜观察3D培养的HT-29细胞形态,并采用免疫组化法检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.电泳迁移率改变测定法(EMSA)测定3D和2D培养细胞中NF-kB的活性差异.将3D培养细胞分为两组:3D组(培养液中不加干扰因素)和3D+SN50组(培养液中加入50μg/ml SN50处理24h),采用EMSA测定两组NF-kB活性差异.TUNEL法检测细胞凋亡,Western blotting检测凋亡相关蛋白(Caspase-3、Bcl-2和Bax)的表达并对蛋白条带的光密度值进行半定量分析,外生半径测定法测定3D培养细胞对氟尿嘧啶的敏感性.结果 3D培养的HT-29细胞悬浮生长,细胞相互聚集增殖形成多细胞球,中心为坏死区,周围由多层异型性细胞组成,外围细胞PCNA阳性染色明显.与2D培养细胞相比,3D细胞中NF-kB活性条带颜色较深.EMSA显示3D+SNS0组NF-kB活性较3D组低,TUNEL法显示3D组细胞凋亡率(8.71%±0.73%)较3D+SN50组(15.75%±1.02%)明显降低(P<0.01).3D+SN50组和3D组中,Caspsse-3活化片段光密度值分别为126.79±13.48和87.24±10.68(P<0.01),Pax蛋白为129.73±15.28和89.26±14.31(P<0.01),Bcl-2蛋白为97.27±12.63和131.24±14.53(P<0.01).结论 NF-kB活性升高是导致结肠癌HT-29细胞多细胞耐药的重要原因之一,其机制可能与凋亡相关蛋白的表达调控有关.
目的 探討NF-kB信號通路在結腸癌HT-29細胞多細胞耐藥中的作用及可能機製.方法 採用液體重疊培養繫統和常規貼壁法對HT-29細胞進行三維(3D)和單層(2D)培養.採用倒置相差顯微鏡、掃描電鏡觀察3D培養的HT-29細胞形態,併採用免疫組化法檢測增殖細胞覈抗原(PCNA)的錶達.電泳遷移率改變測定法(EMSA)測定3D和2D培養細胞中NF-kB的活性差異.將3D培養細胞分為兩組:3D組(培養液中不加榦擾因素)和3D+SN50組(培養液中加入50μg/ml SN50處理24h),採用EMSA測定兩組NF-kB活性差異.TUNEL法檢測細胞凋亡,Western blotting檢測凋亡相關蛋白(Caspase-3、Bcl-2和Bax)的錶達併對蛋白條帶的光密度值進行半定量分析,外生半徑測定法測定3D培養細胞對氟尿嘧啶的敏感性.結果 3D培養的HT-29細胞懸浮生長,細胞相互聚集增殖形成多細胞毬,中心為壞死區,週圍由多層異型性細胞組成,外圍細胞PCNA暘性染色明顯.與2D培養細胞相比,3D細胞中NF-kB活性條帶顏色較深.EMSA顯示3D+SNS0組NF-kB活性較3D組低,TUNEL法顯示3D組細胞凋亡率(8.71%±0.73%)較3D+SN50組(15.75%±1.02%)明顯降低(P<0.01).3D+SN50組和3D組中,Caspsse-3活化片段光密度值分彆為126.79±13.48和87.24±10.68(P<0.01),Pax蛋白為129.73±15.28和89.26±14.31(P<0.01),Bcl-2蛋白為97.27±12.63和131.24±14.53(P<0.01).結論 NF-kB活性升高是導緻結腸癌HT-29細胞多細胞耐藥的重要原因之一,其機製可能與凋亡相關蛋白的錶達調控有關.
목적 탐토NF-kB신호통로재결장암HT-29세포다세포내약중적작용급가능궤제.방법 채용액체중첩배양계통화상규첩벽법대HT-29세포진행삼유(3D)화단층(2D)배양.채용도치상차현미경、소묘전경관찰3D배양적HT-29세포형태,병채용면역조화법검측증식세포핵항원(PCNA)적표체.전영천이솔개변측정법(EMSA)측정3D화2D배양세포중NF-kB적활성차이.장3D배양세포분위량조:3D조(배양액중불가간우인소)화3D+SN50조(배양액중가입50μg/ml SN50처리24h),채용EMSA측정량조NF-kB활성차이.TUNEL법검측세포조망,Western blotting검측조망상관단백(Caspase-3、Bcl-2화Bax)적표체병대단백조대적광밀도치진행반정량분석,외생반경측정법측정3D배양세포대불뇨밀정적민감성.결과 3D배양적HT-29세포현부생장,세포상호취집증식형성다세포구,중심위배사구,주위유다층이형성세포조성,외위세포PCNA양성염색명현.여2D배양세포상비,3D세포중NF-kB활성조대안색교심.EMSA현시3D+SNS0조NF-kB활성교3D조저,TUNEL법현시3D조세포조망솔(8.71%±0.73%)교3D+SN50조(15.75%±1.02%)명현강저(P<0.01).3D+SN50조화3D조중,Caspsse-3활화편단광밀도치분별위126.79±13.48화87.24±10.68(P<0.01),Pax단백위129.73±15.28화89.26±14.31(P<0.01),Bcl-2단백위97.27±12.63화131.24±14.53(P<0.01).결론 NF-kB활성승고시도치결장암HT-29세포다세포내약적중요원인지일,기궤제가능여조망상관단백적표체조공유관.
