CAJ | 학술논문

目的研究人造血增效因子(hHSF)C末端结构与其趋化活性的关系.方法用PCR方法合成编码3种hHSFC末端截短变异体DNA片段,分别重组到pET30a或pET42a中,并在E.coli B121(DE3)中进行表达.hHSF1-66和hHSF1-59用凝胶过滤和阳离子交换层析法进行分离纯化,融合蛋白GST-hHSF1-5 3经亲和层析、肠激酶(EK)酶切和凝胶过滤法进行分离纯化.hHSF3种缺失变异体进行Western blot鉴定,用飞行时间质谱法测定其相对分子质量,用改良的Boyden小室法测定其对人外周血中性粒细胞(PMN)趋化活性.结果测序证实合成的hHSF 1-66、hHSF1-59和hHSF1-53序列与设计一致,hHSF1-66/1-59表达量占菌体总蛋白的20%左右,主要以包涵体形式存在.GST-hHSF1-53表达量占菌体总蛋白的30%以上,主要以可溶形式存在.3种目的蛋白纯度均达95%左右,它们的相对分子质量分别为7206.0、6401.2和5697.3 D,均具有全长hHSF的免疫学活性.与全长hHSF相比,hHSF1-66(缺失3个氨基酸)对人PMN最大趋化活性(CI)(50 nmol/L)没有明显差异,hHSF1-59(缺失10个氨基酸)和hHSF1-53(缺失16个氨基酸,a螺旋完全缺失)最大趋化活性分别下降34.3%和70.5%.结论 hHSFC末端结构,特别是a螺旋结构对维持和稳定hHSF的空间构象起着重要作用.
목적 연구인조혈증효인자(hHSF)C말단결구여기추화활성적관계.방법 용PCR방법합성편마3충hHSFC말단절단변이체DNA편단,분별중조도pET30a혹pET42a중,병재E.coli B121(DE3)중진행표체.hHSF1-66화hHSF1-59용응효과려화양리자교환층석법진행분리순화,융합단백GST-hHSF1-5 3경친화층석、장격매(EK)매절화응효과려법진행분리순화.hHSF3충결실변이체진행Western blot감정,용비행시간질보법측정기상대분자질량,용개량적Boyden소실법측정기대인외주혈중성립세포(PMN)추화활성.결과 측서증실합성적hHSF 1-66、hHSF1-59화hHSF1-53서렬여설계일치,hHSF1-66/1-59표체량점균체총단백적20%좌우,주요이포함체형식존재.GST-hHSF1-53표체량점균체총단백적30%이상,주요이가용형식존재.3충목적단백순도균체95%좌우,타문적상대분자질량분별위7206.0、6401.2화5697.3 D,균구유전장hHSF적면역학활성.여전장hHSF상비,hHSF1-66(결실3개안기산)대인PMN최대추화활성(CI)(50 nmol/L)몰유명현차이,hHSF1-59(결실10개안기산)화hHSF1-53(결실16개안기산,a라선완전결실)최대추화활성분별하강34.3%화70.5%.결론 hHSFC말단결구,특별시a라선결구대유지화은정hHSF적공간구상기착중요작용.