CAJ | 학술논문

目的: 研究利用低剂量腺病毒提高重组腺相关病毒2型(recombined adeno-associated virus,rAAV2)在耐药与非耐药肿瘤细胞中基因表达水平的新方法,并初步探讨其可能的作用机制.方法: rAAV2-GFP单独或联合复制缺陷型腺病毒(Ad5-RFP)或条件复制型腺病毒(Ad5-TERT-RFP)感染人非小细胞肺癌细胞系(NCI-H446)、人肺腺癌细胞系(A549)、人胃癌细胞系(SGC7901)、人口腔黏膜上皮癌细胞系(KB)和人口腔黏膜上皮癌耐长春新碱细胞系(KB/VCR).荧光显微镜观察和流式细胞仪分析肿瘤细胞感染后GFP的表达;Western blotting检测感染后肿瘤细胞GFP蛋白表达及ERK和AKT磷酸化水平;Real-time PCR检测肿瘤细胞内GFP的mRNA表达量、DNA拷贝数,以及细胞表面受体HSPG、αv integrin和FGFR-1的mRNA表达.结果: 流式细胞结果显示,rAAV2-GFP联合Ad5-RFP或Ad-TERT-RFP感染肿瘤细胞24 h后,GFP阳性细胞率和GFP平均荧光亮度分别提高了约0.3～3倍和4～8倍.Western blotting证实联合应用Ad5-RFP感染肿瘤细胞后24 h,GFP蛋白表达增加约4～6倍,肿瘤细胞内ERK和AKT磷酸化水平升高.联合感染后细胞内GFP的mRNA表达量提高了3.83～7.33倍,DNA拷贝数未见明显改变,HSPG、αv integrin和FGFR-1的mRNA表达轻微提高.结论: 低剂量腺病毒显著提高rAAV2在耐药与非耐药肿瘤细胞中的基因表达水平,可能与激活信号传导通路、增加细胞内转录有关.
목적: 연구이용저제량선병독제고중조선상관병독2형(recombined adeno-associated virus,rAAV2)재내약여비내약종류세포중기인표체수평적신방법,병초보탐토기가능적작용궤제.방법: rAAV2-GFP단독혹연합복제결함형선병독(Ad5-RFP)혹조건복제형선병독(Ad5-TERT-RFP)감염인비소세포폐암세포계(NCI-H446)、인폐선암세포계(A549)、인위암세포계(SGC7901)、인구강점막상피암세포계(KB)화인구강점막상피암내장춘신감세포계(KB/VCR).형광현미경관찰화류식세포의분석종류세포감염후GFP적표체;Western blotting검측감염후종류세포GFP단백표체급ERK화AKT린산화수평;Real-time PCR검측종류세포내GFP적mRNA표체량、DNA고패수,이급세포표면수체HSPG、αv integrin화FGFR-1적mRNA표체.결과: 류식세포결과현시,rAAV2-GFP연합Ad5-RFP혹Ad-TERT-RFP감염종류세포24 h후,GFP양성세포솔화GFP평균형광량도분별제고료약0.3～3배화4～8배.Western blotting증실연합응용Ad5-RFP감염종류세포후24 h,GFP단백표체증가약4～6배,종류세포내ERK화AKT린산화수평승고.연합감염후세포내GFP적mRNA표체량제고료3.83～7.33배,DNA고패수미견명현개변,HSPG、αv integrin화FGFR-1적mRNA표체경미제고.결론: 저제량선병독현저제고rAAV2재내약여비내약종류세포중적기인표체수평,가능여격활신호전도통로、증가세포내전록유관.