CAJ | 학술논문

目的:原代培养鼠主动脉平滑肌细胞,传统贴块法往往由于血管片成功贴壁数少而导致失败或存在培养周期长的缺点.反复血管片贴壁法能够克服以上弊端,本实验拟进一步验证.方法:实验于2007-03/06在南昌大学第二附属医院江西省分子中心重点实验室完成.①实验方法:健康Wistar大鼠2只,断颈法处死,分离胸主动脉,清除结缔组织,纵向剖开血管去除内皮细胞,继续用力刮可见血管片分为两层,去掉外层,剩下即为所需的中膜组织,剪细置于无菌培养瓶底,组织块间距不超过0.5 cm,瓶底朝上,向培养瓶内加入5.0～6.0 mL含体积分数为0.15胎牛血清的培养液后,放在大平皿上使瓶口稍朝上,置于37℃孵箱,一次性培养瓶放置1 h(普通培养瓶2～3 h)后将其缓慢翻转平放,使组织块完全浸入培养液中.当一些组织块周围细胞生长相当密集以致失去特有的梭形形态时,即可按1:1或1:2进行传代.②实验评估:采用相差显微镜观察细胞的生长形态及生长规律.免疫化学法检测α-平滑肌肌动蛋白的表达.结果:①细胞生长形态:原代培养第3天,贴附良好的血管片周围细胞呈辐射状生长,形态多样.4～10 d细胞数量增多,细胞生长至融汇后相互平行排列成束或放射状,血管平滑肌细胞特征性"峰"、"谷"状生长特点尤为明显.细胞生长相当密集而传代.②α-平滑肌肌动蛋白免疫组织化学检测:胞浆内出现肌丝,纵向平行排列有密区,α-平滑肌肌动蛋白免疫化学染色呈阳性(棕色).结论:利用反复血管片贴壁法成功进行大鼠主动脉平滑肌细胞的原代培养,具有简便易行、细胞损失小、培养周期短等优点.
목적:원대배양서주동맥평활기세포,전통첩괴법왕왕유우혈관편성공첩벽수소이도치실패혹존재배양주기장적결점.반복혈관편첩벽법능구극복이상폐단,본실험의진일보험증.방법:실험우2007-03/06재남창대학제이부속의원강서성분자중심중점실험실완성.①실험방법:건강Wistar대서2지,단경법처사,분리흉주동맥,청제결체조직,종향부개혈관거제내피세포,계속용력괄가견혈관편분위량층,거도외층,잉하즉위소수적중막조직,전세치우무균배양병저,조직괴간거불초과0.5 cm,병저조상,향배양병내가입5.0～6.0 mL함체적분수위0.15태우혈청적배양액후,방재대평명상사병구초조상,치우37℃부상,일차성배양병방치1 h(보통배양병2～3 h)후장기완만번전평방,사조직괴완전침입배양액중.당일사조직괴주위세포생장상당밀집이치실거특유적사형형태시,즉가안1:1혹1:2진행전대.②실험평고:채용상차현미경관찰세포적생장형태급생장규률.면역화학법검측α-평활기기동단백적표체.결과:①세포생장형태:원대배양제3천,첩부량호적혈관편주위세포정복사상생장,형태다양.4～10 d세포수량증다,세포생장지융회후상호평행배렬성속혹방사상,혈관평활기세포특정성"봉"、"곡"상생장특점우위명현.세포생장상당밀집이전대.②α-평활기기동단백면역조직화학검측:포장내출현기사,종향평행배렬유밀구,α-평활기기동단백면역화학염색정양성(종색).결론:이용반복혈관편첩벽법성공진행대서주동맥평활기세포적원대배양,구유간편역행、세포손실소、배양주기단등우점.