CAJ | 학술논문

目的:从分子水平观察链球菌蛋白质对人肝癌Bel-7402细胞的生长增殖的抑制作用.方法:实验于2005-10/2006-11在首都医科大学病原生物学系实验室完成.①链球菌32080株购自中国医学细菌保藏管理中心,人肝癌Bel-7402细胞株由首都医科大学细胞生物学系惠赠.②常规培养链球菌并按照Winters方法提取细菌蛋白.③用0.10,20.100 mg/L细菌蛋白作用于单层培养的Bel-7402细胞24,48,72 h,采用MTT法检测链球菌蛋白对细胞的增殖抑制作用.④Bel-7402细胞经10 mg/L或50 mg/L细菌蛋白分别作用48,72 h后,流式细胞术检测细菌蛋白对癌细胞生长周期时相分布.⑤Bel-7402细胞经50 mg/L的细菌蛋白分别作用24,48,72 h后,Annexin-v PI双染法检测Bel-7402细胞凋亡率.⑥用50 mg/L的链球菌蛋白分别作用于Bel-7402细胞0,24,48,72 h后,Western Blot检测链球菌蛋白对Bel-7402细胞凋亡相关蛋白的影响.结果:①链球菌蛋白对Bel-7402细胞的抑制作用:链球菌蛋白能显著抑制人肝癌Bel-7402细胞增殖,100 mg/L细菌蛋白作用于细胞24,48,72 h的抑制率分别为15.6%,35.6%,50%,呈剂量和时间依赖关系.②细菌蛋白对肝癌细胞生长周期时相分布及细胞凋亡率的影响:经链球菌蛋白(10,50 mg/L)作用后,G2/M期Bel-7402细胞比率较正常对照组增加,差异有显著性(P＜0.05);流式细胞术检测显示,经50 mg/L链球菌蛋白作用后,实验组Bel-7402细胞凋亡率明显高于对照组细胞(P＜0.01).③Bel-7402细胞凋亡相关蛋白的变化:Bel-7402细胞经50mg/L链球菌蛋白分别作用24,48,72 h后,细胞色素C的释放逐渐增多,Procaspase-3及Bcl-2蛋白水平降低.结论:链球菌32080株蛋白对人肝癌Bel-7402细胞的生长抑制作用存在着剂量和时间依赖性,并能将细胞的生长周期阻滞于G2/M期,诱导细胞凋亡,影响Bcl-2,procaspase-3和细胞色素C等重要的凋亡相关蛋白水平.
목적:종분자수평관찰련구균단백질대인간암Bel-7402세포적생장증식적억제작용.방법:실험우2005-10/2006-11재수도의과대학병원생물학계실험실완성.①련구균32080주구자중국의학세균보장관리중심,인간암Bel-7402세포주유수도의과대학세포생물학계혜증.②상규배양련구균병안조Winters방법제취세균단백.③용0.10,20.100 mg/L세균단백작용우단층배양적Bel-7402세포24,48,72 h,채용MTT법검측련구균단백대세포적증식억제작용.④Bel-7402세포경10 mg/L혹50 mg/L세균단백분별작용48,72 h후,류식세포술검측세균단백대암세포생장주기시상분포.⑤Bel-7402세포경50 mg/L적세균단백분별작용24,48,72 h후,Annexin-v PI쌍염법검측Bel-7402세포조망솔.⑥용50 mg/L적련구균단백분별작용우Bel-7402세포0,24,48,72 h후,Western Blot검측련구균단백대Bel-7402세포조망상관단백적영향.결과:①련구균단백대Bel-7402세포적억제작용:련구균단백능현저억제인간암Bel-7402세포증식,100 mg/L세균단백작용우세포24,48,72 h적억제솔분별위15.6%,35.6%,50%,정제량화시간의뢰관계.②세균단백대간암세포생장주기시상분포급세포조망솔적영향:경련구균단백(10,50 mg/L)작용후,G2/M기Bel-7402세포비솔교정상대조조증가,차이유현저성(P＜0.05);류식세포술검측현시,경50 mg/L련구균단백작용후,실험조Bel-7402세포조망솔명현고우대조조세포(P＜0.01).③Bel-7402세포조망상관단백적변화:Bel-7402세포경50mg/L련구균단백분별작용24,48,72 h후,세포색소C적석방축점증다,Procaspase-3급Bcl-2단백수평강저.결론:련구균32080주단백대인간암Bel-7402세포적생장억제작용존재착제량화시간의뢰성,병능장세포적생장주기조체우G2/M기,유도세포조망,영향Bcl-2,procaspase-3화세포색소C등중요적조망상관단백수평.