胃肠病学和肝病学杂志
胃腸病學和肝病學雜誌
위장병학화간병학잡지
CHINESE JOURNAL OF GASTROENTEROLOGY AND HEPATOLOGY
2007年
4期
316-318
,共3页
赵友云%高应林%王春香%乐惠荣
趙友雲%高應林%王春香%樂惠榮
조우운%고응림%왕춘향%악혜영
荧光标记%聚合酶链反应%乙型肝炎病毒核酸%熔解温度
熒光標記%聚閤酶鏈反應%乙型肝炎病毒覈痠%鎔解溫度
형광표기%취합매련반응%을형간염병독핵산%용해온도
目的 通过改进荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)的单荧光标记,建立灵敏、特异的HBV-DNA含量及其熔解温度(Tm)的同步检测方法.方法 根据荧光标记物质的不同,将FQ-PCR分为TaqMan+SYBR Green I双标记(T+S组)、TaqMan探针单标记(T组)和SYBR Green I染料单标记(S组)三种,同时检测HBV-DNA已知浓度为108.48、105.70、103.70和＜1×103.00(copies/ml)的血清中HBV-DNA含量及Tm,每组FQ-PCR检测每份血清时1次做5个平行管.结果 T+S组检测的HBV-DNA阳性血清均为阳性,其平均含量为108.55±0.32、105.79±0.29、103.81±0.30,与T组的108.49±0.31、105.69±0.30、103.72±0.25copies/ml对应浓度值取10对数比较,无统计学意义(t=0.31、0.54和0.27,P＞0.05);与S组的108.41±0.35、105.21±0.34和103.26±0.26 copies/ml(不含未检出的两次血清)比较,除高浓度外,中低浓度有统计学意义(t=2.90和2.62,P＜0.05).T+S组和S组阳性血清均出现明显熔解曲线,Tm分别为71.8℃、72℃和79.8℃,阴性血清未出现扩增曲线和Tm值.T+S组、T组和S组的灵敏度分别为102.70、102.70和103.00copies/ml.结论 改良的SYBR Green I和TaqMan探针双标记的FQ-PCR检测HBV-DNA时,兼有TaqMan探针标记FQ-PCR的灵敏度高、特异性强和SYBR Green I标记FQ-PCR的Tm分析的优点,能达到同步检测HBV-DNA含量及其Tm的目的 ,为HBV-DNA含量及其多态性分析,尤其是为HBV-DNA含量及其基因分型同步检测提供了新思路.
目的 通過改進熒光定量聚閤酶鏈反應(FQ-PCR)的單熒光標記,建立靈敏、特異的HBV-DNA含量及其鎔解溫度(Tm)的同步檢測方法.方法 根據熒光標記物質的不同,將FQ-PCR分為TaqMan+SYBR Green I雙標記(T+S組)、TaqMan探針單標記(T組)和SYBR Green I染料單標記(S組)三種,同時檢測HBV-DNA已知濃度為108.48、105.70、103.70和＜1×103.00(copies/ml)的血清中HBV-DNA含量及Tm,每組FQ-PCR檢測每份血清時1次做5箇平行管.結果 T+S組檢測的HBV-DNA暘性血清均為暘性,其平均含量為108.55±0.32、105.79±0.29、103.81±0.30,與T組的108.49±0.31、105.69±0.30、103.72±0.25copies/ml對應濃度值取10對數比較,無統計學意義(t=0.31、0.54和0.27,P＞0.05);與S組的108.41±0.35、105.21±0.34和103.26±0.26 copies/ml(不含未檢齣的兩次血清)比較,除高濃度外,中低濃度有統計學意義(t=2.90和2.62,P＜0.05).T+S組和S組暘性血清均齣現明顯鎔解麯線,Tm分彆為71.8℃、72℃和79.8℃,陰性血清未齣現擴增麯線和Tm值.T+S組、T組和S組的靈敏度分彆為102.70、102.70和103.00copies/ml.結論 改良的SYBR Green I和TaqMan探針雙標記的FQ-PCR檢測HBV-DNA時,兼有TaqMan探針標記FQ-PCR的靈敏度高、特異性彊和SYBR Green I標記FQ-PCR的Tm分析的優點,能達到同步檢測HBV-DNA含量及其Tm的目的 ,為HBV-DNA含量及其多態性分析,尤其是為HBV-DNA含量及其基因分型同步檢測提供瞭新思路.
목적 통과개진형광정량취합매련반응(FQ-PCR)적단형광표기,건립령민、특이적HBV-DNA함량급기용해온도(Tm)적동보검측방법.방법 근거형광표기물질적불동,장FQ-PCR분위TaqMan+SYBR Green I쌍표기(T+S조)、TaqMan탐침단표기(T조)화SYBR Green I염료단표기(S조)삼충,동시검측HBV-DNA이지농도위108.48、105.70、103.70화＜1×103.00(copies/ml)적혈청중HBV-DNA함량급Tm,매조FQ-PCR검측매빈혈청시1차주5개평행관.결과 T+S조검측적HBV-DNA양성혈청균위양성,기평균함량위108.55±0.32、105.79±0.29、103.81±0.30,여T조적108.49±0.31、105.69±0.30、103.72±0.25copies/ml대응농도치취10대수비교,무통계학의의(t=0.31、0.54화0.27,P＞0.05);여S조적108.41±0.35、105.21±0.34화103.26±0.26 copies/ml(불함미검출적량차혈청)비교,제고농도외,중저농도유통계학의의(t=2.90화2.62,P＜0.05).T+S조화S조양성혈청균출현명현용해곡선,Tm분별위71.8℃、72℃화79.8℃,음성혈청미출현확증곡선화Tm치.T+S조、T조화S조적령민도분별위102.70、102.70화103.00copies/ml.결론 개량적SYBR Green I화TaqMan탐침쌍표기적FQ-PCR검측HBV-DNA시,겸유TaqMan탐침표기FQ-PCR적령민도고、특이성강화SYBR Green I표기FQ-PCR적Tm분석적우점,능체도동보검측HBV-DNA함량급기Tm적목적 ,위HBV-DNA함량급기다태성분석,우기시위HBV-DNA함량급기기인분형동보검측제공료신사로.
