中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2007年
8期
29-33
,共5页
郑海学%郭慧琛%靳野%刘湘涛%谢庆阁
鄭海學%郭慧琛%靳野%劉湘濤%謝慶閣
정해학%곽혜침%근야%류상도%사경각
口蹄疫病毒%IRES%双顺反子%双顺反子载体
口蹄疫病毒%IRES%雙順反子%雙順反子載體
구제역병독%IRES%쌍순반자%쌍순반자재체
利用RT-PCR扩增出口蹄疫病毒小核糖体进入位点(IRES)序列,并定向克隆进pcDNA3.1(+)载体,构建成双顺反子真核表达载体.为了验证该载体是否能够转录出双顺反子mRNA,在IRES起始密码(ATG)下游正确插入增强型的绿色荧光蛋白基因(egfp),把重组质粒转染BHK-21细胞,培养20～48 h,在紫外显微镜下观察,能够看到典型的绿色荧光,表明载体能够体能够利用FMDV的IRES能够介导非帽依赖性表达外源基因.并通过流式细胞仪,与同样是CMV启动转录egfp的pGFPN1质粒在细胞中的表达水平进行了比较.该载体的成功构建为体外表达双基因、双顺反子逆转录载体构建以及相关应用奠定基础,并有作为基因疫苗和标记定位基因治疗载体的潜力.
利用RT-PCR擴增齣口蹄疫病毒小覈糖體進入位點(IRES)序列,併定嚮剋隆進pcDNA3.1(+)載體,構建成雙順反子真覈錶達載體.為瞭驗證該載體是否能夠轉錄齣雙順反子mRNA,在IRES起始密碼(ATG)下遊正確插入增彊型的綠色熒光蛋白基因(egfp),把重組質粒轉染BHK-21細胞,培養20～48 h,在紫外顯微鏡下觀察,能夠看到典型的綠色熒光,錶明載體能夠體能夠利用FMDV的IRES能夠介導非帽依賴性錶達外源基因.併通過流式細胞儀,與同樣是CMV啟動轉錄egfp的pGFPN1質粒在細胞中的錶達水平進行瞭比較.該載體的成功構建為體外錶達雙基因、雙順反子逆轉錄載體構建以及相關應用奠定基礎,併有作為基因疫苗和標記定位基因治療載體的潛力.
이용RT-PCR확증출구제역병독소핵당체진입위점(IRES)서렬,병정향극륭진pcDNA3.1(+)재체,구건성쌍순반자진핵표체재체.위료험증해재체시부능구전록출쌍순반자mRNA,재IRES기시밀마(ATG)하유정학삽입증강형적록색형광단백기인(egfp),파중조질립전염BHK-21세포,배양20～48 h,재자외현미경하관찰,능구간도전형적록색형광,표명재체능구체능구이용FMDV적IRES능구개도비모의뢰성표체외원기인.병통과류식세포의,여동양시CMV계동전록egfp적pGFPN1질립재세포중적표체수평진행료비교.해재체적성공구건위체외표체쌍기인、쌍순반자역전록재체구건이급상관응용전정기출,병유작위기인역묘화표기정위기인치료재체적잠력.
