天津医药
天津醫藥
천진의약
TIANJIN MEDICAL JOURNAL
2007年
6期
401-404
,共4页
洪敬欣%邵洁%史雪彬%姚智%杨洁
洪敬訢%邵潔%史雪彬%姚智%楊潔
홍경흔%소길%사설빈%요지%양길
HeLa细胞%基因表达%遗传载体%质粒%克隆,分子%逆转录聚合酶链反应%人%U5·116 ku蛋白
HeLa細胞%基因錶達%遺傳載體%質粒%剋隆,分子%逆轉錄聚閤酶鏈反應%人%U5·116 ku蛋白
HeLa세포%기인표체%유전재체%질립%극륭,분자%역전록취합매련반응%인%U5·116 ku단백
目的:构建人类U5·116 ku基因全长真核表达质粒.方法:从HeLa细胞中提取总体RNA,一步法合成单链cDNA,利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法,扩增出人类U5·116 ku基因两段连续的序列,首先分别克隆至pTZ57R/T载体,两段序列连接成全长后再定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1(-),构建pcDNA3.1(-)-U5·116 ku重组质粒.结果:RT-PCR法获得U5·116 ku基因两段连续的序列,长度分别为1 672 bp和1 246 bp,分别与pTZ57R/T载体连接后,选择合适的酶切位点再连接成全长序列,然后将全长序列和pcDNA3.1(-)真核表达载体进行连接、转化、酶切鉴定及序列分析后,证实pcDNA3.1(-)-U5·116 ku重组质粒构建成功.结论:成功克隆了人类U5·116 ku的编码基因,并构建了其真核表达质粒pcDNA3.1(-)-U5·116 ku.
目的:構建人類U5·116 ku基因全長真覈錶達質粒.方法:從HeLa細胞中提取總體RNA,一步法閤成單鏈cDNA,利用逆轉錄聚閤酶鏈反應(RT-PCR)法,擴增齣人類U5·116 ku基因兩段連續的序列,首先分彆剋隆至pTZ57R/T載體,兩段序列連接成全長後再定嚮剋隆至真覈錶達載體pcDNA3.1(-),構建pcDNA3.1(-)-U5·116 ku重組質粒.結果:RT-PCR法穫得U5·116 ku基因兩段連續的序列,長度分彆為1 672 bp和1 246 bp,分彆與pTZ57R/T載體連接後,選擇閤適的酶切位點再連接成全長序列,然後將全長序列和pcDNA3.1(-)真覈錶達載體進行連接、轉化、酶切鑒定及序列分析後,證實pcDNA3.1(-)-U5·116 ku重組質粒構建成功.結論:成功剋隆瞭人類U5·116 ku的編碼基因,併構建瞭其真覈錶達質粒pcDNA3.1(-)-U5·116 ku.
목적:구건인류U5·116 ku기인전장진핵표체질립.방법:종HeLa세포중제취총체RNA,일보법합성단련cDNA,이용역전록취합매련반응(RT-PCR)법,확증출인류U5·116 ku기인량단련속적서렬,수선분별극륭지pTZ57R/T재체,량단서렬련접성전장후재정향극륭지진핵표체재체pcDNA3.1(-),구건pcDNA3.1(-)-U5·116 ku중조질립.결과:RT-PCR법획득U5·116 ku기인량단련속적서렬,장도분별위1 672 bp화1 246 bp,분별여pTZ57R/T재체련접후,선택합괄적매절위점재련접성전장서렬,연후장전장서렬화pcDNA3.1(-)진핵표체재체진행련접、전화、매절감정급서렬분석후,증실pcDNA3.1(-)-U5·116 ku중조질립구건성공.결론:성공극륭료인류U5·116 ku적편마기인,병구건료기진핵표체질립pcDNA3.1(-)-U5·116 ku.
