生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2006年
2期
237-242
,共6页
郭建强%李运敏%岳丽丽%邱阳生%矫庆华
郭建彊%李運敏%嶽麗麗%邱暘生%矯慶華
곽건강%리운민%악려려%구양생%교경화
超耐热酸性α-淀粉酶%激烈热球菌Pyrococcus furiosus%pPIC9K质粒%毕赤酵母GS115
超耐熱痠性α-澱粉酶%激烈熱毬菌Pyrococcus furiosus%pPIC9K質粒%畢赤酵母GS115
초내열산성α-정분매%격렬열구균Pyrococcus furiosus%pPIC9K질립%필적효모GS115
用PCR方法扩增来源于极端嗜热厌氧古菌Pyrococcus furiosus中的超耐热酸性α-淀粉酶的结构基因,将该结构基因引入载体pPIC9K中,将重组质粒pPIC9K-Amy转化大肠杆菌DH5α细胞,测序结果表明,克隆到的α-淀粉酶结构基因为1305bp,其编码的成熟肽为435个氨基酸.将正确构建的重组质粒转化毕赤酵母GS115细胞,得到酵母工程菌株.在酵母α-Factor及AOX1基因启动子和终止信号的调控下,超耐热酸性α-淀粉酶在甲醇酵母中大量表达并分泌到胞外,该酶的表达受甲醇的严格调控和诱导,随着诱导培养时间的增加,在培养基上清液中的单位体积酶活力相应上升,在诱导培养7d后酶活力达到最大值.该酶最适反应温度为90～100℃,最适反应pH值为4.5～5.5.该酶具有非常好的温度稳定性,在100℃条件下热处理5h,仍具有60%以上的酶活力.该酶的这些优点使其非常适于在工业生产上应用.
用PCR方法擴增來源于極耑嗜熱厭氧古菌Pyrococcus furiosus中的超耐熱痠性α-澱粉酶的結構基因,將該結構基因引入載體pPIC9K中,將重組質粒pPIC9K-Amy轉化大腸桿菌DH5α細胞,測序結果錶明,剋隆到的α-澱粉酶結構基因為1305bp,其編碼的成熟肽為435箇氨基痠.將正確構建的重組質粒轉化畢赤酵母GS115細胞,得到酵母工程菌株.在酵母α-Factor及AOX1基因啟動子和終止信號的調控下,超耐熱痠性α-澱粉酶在甲醇酵母中大量錶達併分泌到胞外,該酶的錶達受甲醇的嚴格調控和誘導,隨著誘導培養時間的增加,在培養基上清液中的單位體積酶活力相應上升,在誘導培養7d後酶活力達到最大值.該酶最適反應溫度為90～100℃,最適反應pH值為4.5～5.5.該酶具有非常好的溫度穩定性,在100℃條件下熱處理5h,仍具有60%以上的酶活力.該酶的這些優點使其非常適于在工業生產上應用.
용PCR방법확증래원우겁단기열염양고균Pyrococcus furiosus중적초내열산성α-정분매적결구기인,장해결구기인인입재체pPIC9K중,장중조질립pPIC9K-Amy전화대장간균DH5α세포,측서결과표명,극륭도적α-정분매결구기인위1305bp,기편마적성숙태위435개안기산.장정학구건적중조질립전화필적효모GS115세포,득도효모공정균주.재효모α-Factor급AOX1기인계동자화종지신호적조공하,초내열산성α-정분매재갑순효모중대량표체병분비도포외,해매적표체수갑순적엄격조공화유도,수착유도배양시간적증가,재배양기상청액중적단위체적매활력상응상승,재유도배양7d후매활력체도최대치.해매최괄반응온도위90～100℃,최괄반응pH치위4.5～5.5.해매구유비상호적온도은정성,재100℃조건하열처리5h,잉구유60%이상적매활력.해매적저사우점사기비상괄우재공업생산상응용.
