CAJ | 학술논문

目的:获得重组人干细胞因子/血小板生成素(SCF-TPO)融合蛋白的高表达,预测该全新型融合蛋白的蛋白质结构.方法:设计引物,利用RT-PCR从胎肝细胞中扩增SCF和TPO氨基端功能区片段,采用基因融合新策略将其融合成SCF-TPO融合基因,构建pET32a/SCF-TPO融合基因重组表达载体,在E.coli BL21(DE3)plysS中获得正确高表达,采用生物信息学方法对融合蛋白的结构特征进行模拟分析.结果:首次成功构建了pET32a/SCF-TPO原核表达载体,并获得了融合蛋白的高表达,表达量高达40%,主要以包涵体形式表达.蛋白结构预测结果显示,融合蛋白的等电点、抗原性及亲水性无显著改变,接头序列具有高柔性.融合蛋白除一级结构有4个氨基酸发生改变外,原来的α螺旋和β片层无改变.结论:获得了SCF-TPO融合蛋白的高表达,结构预测融合蛋白的设计符合要求.为进一步研究SCF-TPO融合蛋白的生物学特性奠定了基础.
목적:획득중조인간세포인자/혈소판생성소(SCF-TPO)융합단백적고표체,예측해전신형융합단백적단백질결구.방법:설계인물,이용RT-PCR종태간세포중확증SCF화TPO안기단공능구편단,채용기인융합신책략장기융합성SCF-TPO융합기인,구건pET32a/SCF-TPO융합기인중조표체재체,재E.coli BL21(DE3)plysS중획득정학고표체,채용생물신식학방법대융합단백적결구특정진행모의분석.결과:수차성공구건료pET32a/SCF-TPO원핵표체재체,병획득료융합단백적고표체,표체량고체40%,주요이포함체형식표체.단백결구예측결과현시,융합단백적등전점、항원성급친수성무현저개변,접두서렬구유고유성.융합단백제일급결구유4개안기산발생개변외,원래적α라선화β편층무개변.결론:획득료SCF-TPO융합단백적고표체,결구예측융합단백적설계부합요구.위진일보연구SCF-TPO융합단백적생물학특성전정료기출.