中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2005年
5期
661-664
,共4页
谢谆怡%江渝%叶治家%彭家和%何凤田%曹廷兵
謝諄怡%江渝%葉治傢%彭傢和%何鳳田%曹廷兵
사순이%강투%협치가%팽가화%하봉전%조정병
过氧化物酶体增殖物激活受体γ%噬菌体表面呈现%亲和筛选
過氧化物酶體增殖物激活受體γ%噬菌體錶麵呈現%親和篩選
과양화물매체증식물격활수체γ%서균체표면정현%친화사선
为筛选与核受体过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)结合的功能短肽,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达PPARγ配体结合域(LBD)的融合蛋白,并利用Ni2+-NTA离子交换树脂对表达蛋白进行纯化.以此纯化蛋白为靶,采用固体包被法对噬菌体展示随机十二肽库及环七肽库进行亲和筛选.经ELISA法鉴定特异结合的高亲和力阳性噬菌体单克隆并测序.同时利用PPARγ的配体rosiglitazone与噬菌体小肽进行竞争性结合抑制实验.最终获得与PPARγ-LBD高亲和力的十二肽3个,环七肽5个,分别含LXXLL和DXXRW(其中X为非特异氨基酸残基)保守序列.Rosiglitazone不影响噬菌体小肽与靶蛋白的结合,说明获得与配体rosiglitazone结合位点不同的目的肽.
為篩選與覈受體過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)結閤的功能短肽,在大腸桿菌BL21(DE3)中錶達PPARγ配體結閤域(LBD)的融閤蛋白,併利用Ni2+-NTA離子交換樹脂對錶達蛋白進行純化.以此純化蛋白為靶,採用固體包被法對噬菌體展示隨機十二肽庫及環七肽庫進行親和篩選.經ELISA法鑒定特異結閤的高親和力暘性噬菌體單剋隆併測序.同時利用PPARγ的配體rosiglitazone與噬菌體小肽進行競爭性結閤抑製實驗.最終穫得與PPARγ-LBD高親和力的十二肽3箇,環七肽5箇,分彆含LXXLL和DXXRW(其中X為非特異氨基痠殘基)保守序列.Rosiglitazone不影響噬菌體小肽與靶蛋白的結閤,說明穫得與配體rosiglitazone結閤位點不同的目的肽.
위사선여핵수체과양화물매체증식물격활수체γ(PPARγ)결합적공능단태,재대장간균BL21(DE3)중표체PPARγ배체결합역(LBD)적융합단백,병이용Ni2+-NTA리자교환수지대표체단백진행순화.이차순화단백위파,채용고체포피법대서균체전시수궤십이태고급배칠태고진행친화사선.경ELISA법감정특이결합적고친화력양성서균체단극륭병측서.동시이용PPARγ적배체rosiglitazone여서균체소태진행경쟁성결합억제실험.최종획득여PPARγ-LBD고친화력적십이태3개,배칠태5개,분별함LXXLL화DXXRW(기중X위비특이안기산잔기)보수서렬.Rosiglitazone불영향서균체소태여파단백적결합,설명획득여배체rosiglitazone결합위점불동적목적태.
