实用肝脏病杂志
實用肝髒病雜誌
실용간장병잡지
JOURNAL OF CLINICAL HEPATOLOGY
2003年
4期
193-196
,共4页
戴炜%周荣%董艳荣%温淑娟%禹弘
戴煒%週榮%董豔榮%溫淑娟%禹弘
대위%주영%동염영%온숙연%우홍
乙型肝炎病毒%丁型肝炎病毒%核酶
乙型肝炎病毒%丁型肝炎病毒%覈酶
을형간염병독%정형간염병독%핵매
目的利用基因重组技术,用核酶基因置换HDV部分基因,分别用HBV特异性核酶(rRZ)和核酶-HDV重组体(rHDVRZA、rHDVRZB和rHDVRZC)研究体外转录与剪切HBV的活性.方法将含有831bp的HBV C基因片段的质粒pTA-HBV用BamHI消化成线性后,体外转录获取5'端32P标记靶HBV C RNA.将获得的3个核酶-HBV重组体rHDVRZA、rHDVRZB和rHDVRZC克隆于pGEM-T载体T7启动子下游进行非标记的大量转录.分别将rRZ、rHDVRZA、rHD-VRZB和rHDVRZC与32P-HBV C RNA按一定比例和条件保温切割.结果体外实验证明rRZ、rHDVRZA、rHDVRZB和rHD-VRZC在37℃具有酶切活性,提示所设计的核酶-HDV重组体rHDVRZA和rHDVRZB中核酶结构正确.结论在HDV基因组不同位置插入核酶,能够维持酶正确结构的核酶-HDV具有体外特异性切割HBV的活性.
目的利用基因重組技術,用覈酶基因置換HDV部分基因,分彆用HBV特異性覈酶(rRZ)和覈酶-HDV重組體(rHDVRZA、rHDVRZB和rHDVRZC)研究體外轉錄與剪切HBV的活性.方法將含有831bp的HBV C基因片段的質粒pTA-HBV用BamHI消化成線性後,體外轉錄穫取5'耑32P標記靶HBV C RNA.將穫得的3箇覈酶-HBV重組體rHDVRZA、rHDVRZB和rHDVRZC剋隆于pGEM-T載體T7啟動子下遊進行非標記的大量轉錄.分彆將rRZ、rHDVRZA、rHD-VRZB和rHDVRZC與32P-HBV C RNA按一定比例和條件保溫切割.結果體外實驗證明rRZ、rHDVRZA、rHDVRZB和rHD-VRZC在37℃具有酶切活性,提示所設計的覈酶-HDV重組體rHDVRZA和rHDVRZB中覈酶結構正確.結論在HDV基因組不同位置插入覈酶,能夠維持酶正確結構的覈酶-HDV具有體外特異性切割HBV的活性.
목적이용기인중조기술,용핵매기인치환HDV부분기인,분별용HBV특이성핵매(rRZ)화핵매-HDV중조체(rHDVRZA、rHDVRZB화rHDVRZC)연구체외전록여전절HBV적활성.방법장함유831bp적HBV C기인편단적질립pTA-HBV용BamHI소화성선성후,체외전록획취5'단32P표기파HBV C RNA.장획득적3개핵매-HBV중조체rHDVRZA、rHDVRZB화rHDVRZC극륭우pGEM-T재체T7계동자하유진행비표기적대량전록.분별장rRZ、rHDVRZA、rHD-VRZB화rHDVRZC여32P-HBV C RNA안일정비례화조건보온절할.결과체외실험증명rRZ、rHDVRZA、rHDVRZB화rHD-VRZC재37℃구유매절활성,제시소설계적핵매-HDV중조체rHDVRZA화rHDVRZB중핵매결구정학.결론재HDV기인조불동위치삽입핵매,능구유지매정학결구적핵매-HDV구유체외특이성절할HBV적활성.
