食品与发酵工业
食品與髮酵工業
식품여발효공업
FOOD AND FERMENTATION INDUSTRIES
2003年
3期
10-14
,共5页
沈微%王正祥%刘吉泉%诸葛健
瀋微%王正祥%劉吉泉%諸葛健
침미%왕정상%류길천%제갈건
Pyrococcus furiosus,耐热α-淀粉酶,融合表达
Pyrococcus furiosus,耐熱α-澱粉酶,融閤錶達
Pyrococcus furiosus,내열α-정분매,융합표체
用PCR方法从嗜热古细菌Pyrococcus furiosus的基因组DNA中扩增出胞外α-淀粉酶完整结构基因,插入表达载体pET28a中构建成质粒pET-amy(sig+),以质粒pET-amy(sig+)为底物扩增出不含信号序列的α-淀粉酶成熟肽基因片断,获得质粒pET-amy(sig-),将重组质粒分别转化大肠杆菌BL21(DE3).在T7启动子和lac 操纵子控制下,通过IPTG的诱导在重组大肠杆菌细胞内分别表达出含信号肽和不含信号肽的融合蛋白.其中不含信号肽的融合蛋白具有与P. furiosus产生的胞外α-淀粉酶相似的酶学性质:最适pH为5.0,最适温度约为95℃,在121℃下热处理1 h酶活仍能保持50%以上;含信号肽序列的基因的表达产物不能测到酶活.
用PCR方法從嗜熱古細菌Pyrococcus furiosus的基因組DNA中擴增齣胞外α-澱粉酶完整結構基因,插入錶達載體pET28a中構建成質粒pET-amy(sig+),以質粒pET-amy(sig+)為底物擴增齣不含信號序列的α-澱粉酶成熟肽基因片斷,穫得質粒pET-amy(sig-),將重組質粒分彆轉化大腸桿菌BL21(DE3).在T7啟動子和lac 操縱子控製下,通過IPTG的誘導在重組大腸桿菌細胞內分彆錶達齣含信號肽和不含信號肽的融閤蛋白.其中不含信號肽的融閤蛋白具有與P. furiosus產生的胞外α-澱粉酶相似的酶學性質:最適pH為5.0,最適溫度約為95℃,在121℃下熱處理1 h酶活仍能保持50%以上;含信號肽序列的基因的錶達產物不能測到酶活.
용PCR방법종기열고세균Pyrococcus furiosus적기인조DNA중확증출포외α-정분매완정결구기인,삽입표체재체pET28a중구건성질립pET-amy(sig+),이질립pET-amy(sig+)위저물확증출불함신호서렬적α-정분매성숙태기인편단,획득질립pET-amy(sig-),장중조질립분별전화대장간균BL21(DE3).재T7계동자화lac 조종자공제하,통과IPTG적유도재중조대장간균세포내분별표체출함신호태화불함신호태적융합단백.기중불함신호태적융합단백구유여P. furiosus산생적포외α-정분매상사적매학성질:최괄pH위5.0,최괄온도약위95℃,재121℃하열처리1 h매활잉능보지50%이상;함신호태서렬적기인적표체산물불능측도매활.
