动物学研究
動物學研究
동물학연구
ZOOLOGICAL RESEARCH
2003年
3期
215-219
,共5页
申本昌%金治平%赵德修%乔传令
申本昌%金治平%趙德脩%喬傳令
신본창%금치평%조덕수%교전령
小菜蛾%cDNA文库%SMART
小菜蛾%cDNA文庫%SMART
소채아%cDNA문고%SMART
采用SMART(switching mechanism at 5' end of RNA transcript)技术,构建了小菜蛾(Plutella xylostella)的全长cDNA文库.按TRIzol试剂盒的操作程序提取4龄期小菜蛾总RNA,以此为模板,通过PowerScript逆转录酶逆转录合成第一链cDNA;再以第一链cDNA产物为模板,用LD-PCR合成第二链cDNA.该cDNA产物经分级分离和体外包装,即获得小菜蛾cDNA原始文库,其滴度为2.6×106pfu/mL.扩增后的cDNA文库的滴度为2.4×1010pfu/mL.取适量扩增文库稀释并铺平板,挑取60个独立噬菌斑,用PCR方法测得文库的重组率大于96%,插入cDNA的长度平均为1.6kb.对60个独立噬菌体所插入的cDNA进行测序,克隆到了一个具有5'和3'非编码区的L27A核糖体蛋白基因.
採用SMART(switching mechanism at 5' end of RNA transcript)技術,構建瞭小菜蛾(Plutella xylostella)的全長cDNA文庫.按TRIzol試劑盒的操作程序提取4齡期小菜蛾總RNA,以此為模闆,通過PowerScript逆轉錄酶逆轉錄閤成第一鏈cDNA;再以第一鏈cDNA產物為模闆,用LD-PCR閤成第二鏈cDNA.該cDNA產物經分級分離和體外包裝,即穫得小菜蛾cDNA原始文庫,其滴度為2.6×106pfu/mL.擴增後的cDNA文庫的滴度為2.4×1010pfu/mL.取適量擴增文庫稀釋併鋪平闆,挑取60箇獨立噬菌斑,用PCR方法測得文庫的重組率大于96%,插入cDNA的長度平均為1.6kb.對60箇獨立噬菌體所插入的cDNA進行測序,剋隆到瞭一箇具有5'和3'非編碼區的L27A覈糖體蛋白基因.
채용SMART(switching mechanism at 5' end of RNA transcript)기술,구건료소채아(Plutella xylostella)적전장cDNA문고.안TRIzol시제합적조작정서제취4령기소채아총RNA,이차위모판,통과PowerScript역전록매역전록합성제일련cDNA;재이제일련cDNA산물위모판,용LD-PCR합성제이련cDNA.해cDNA산물경분급분리화체외포장,즉획득소채아cDNA원시문고,기적도위2.6×106pfu/mL.확증후적cDNA문고적적도위2.4×1010pfu/mL.취괄량확증문고희석병포평판,도취60개독립서균반,용PCR방법측득문고적중조솔대우96%,삽입cDNA적장도평균위1.6kb.대60개독립서균체소삽입적cDNA진행측서,극륭도료일개구유5'화3'비편마구적L27A핵당체단백기인.
