中国科学C辑
中國科學C輯
중국과학C집
SCIENCE IN CHINA (SERIES C)
2001年
4期
335-342
,共8页
周江%程萱%孙彦洵%黄培堂%黄翠芬%杨晓
週江%程萱%孫彥洵%黃培堂%黃翠芬%楊曉
주강%정훤%손언순%황배당%황취분%양효
Smad2 ES细胞 Cre重组酶 条件基因打靶
Smad2 ES細胞 Cre重組酶 條件基因打靶
Smad2 ES세포 Cre중조매 조건기인타파
Smads家族是转化生长因子TGF-β信号转导途径中一个重要的新基因家族,SMAD2属于受体激活的SMADs.Smad2基因在多种肿瘤中发生突变,是一种可能的肿瘤抑制基因.Smad2基因完全剔除导致小鼠在胚胎期6.5d死亡.为了研究Smad2在脊椎动物成体各组织器官及肿瘤发生中的可能作用,利用Cre/LoxP系统构建了Smad2条件基因打靶载体,将两个方向相同的LoxP序列置于编码SMAD2蛋白C末端功能域序列两侧的内含子中,并在组成型表达Cre重组酶的大肠杆菌中检测了LoxP位点的功能;用打靶载体电击转染小鼠胚胎干细胞,经Southern杂交筛选到3株发生正确同源重组的中靶ES细胞克隆;通过囊胚显微注射将中靶ES细胞导入受体小鼠囊胚腔,获得了ES细胞种系嵌合体;对高嵌合度小鼠与C57BL/6J的子代小鼠进行基因型鉴定,成功地获得了Smad2条件基因打靶小鼠.
Smads傢族是轉化生長因子TGF-β信號轉導途徑中一箇重要的新基因傢族,SMAD2屬于受體激活的SMADs.Smad2基因在多種腫瘤中髮生突變,是一種可能的腫瘤抑製基因.Smad2基因完全剔除導緻小鼠在胚胎期6.5d死亡.為瞭研究Smad2在脊椎動物成體各組織器官及腫瘤髮生中的可能作用,利用Cre/LoxP繫統構建瞭Smad2條件基因打靶載體,將兩箇方嚮相同的LoxP序列置于編碼SMAD2蛋白C末耑功能域序列兩側的內含子中,併在組成型錶達Cre重組酶的大腸桿菌中檢測瞭LoxP位點的功能;用打靶載體電擊轉染小鼠胚胎榦細胞,經Southern雜交篩選到3株髮生正確同源重組的中靶ES細胞剋隆;通過囊胚顯微註射將中靶ES細胞導入受體小鼠囊胚腔,穫得瞭ES細胞種繫嵌閤體;對高嵌閤度小鼠與C57BL/6J的子代小鼠進行基因型鑒定,成功地穫得瞭Smad2條件基因打靶小鼠.
Smads가족시전화생장인자TGF-β신호전도도경중일개중요적신기인가족,SMAD2속우수체격활적SMADs.Smad2기인재다충종류중발생돌변,시일충가능적종류억제기인.Smad2기인완전척제도치소서재배태기6.5d사망.위료연구Smad2재척추동물성체각조직기관급종류발생중적가능작용,이용Cre/LoxP계통구건료Smad2조건기인타파재체,장량개방향상동적LoxP서렬치우편마SMAD2단백C말단공능역서렬량측적내함자중,병재조성형표체Cre중조매적대장간균중검측료LoxP위점적공능;용타파재체전격전염소서배태간세포,경Southern잡교사선도3주발생정학동원중조적중파ES세포극륭;통과낭배현미주사장중파ES세포도입수체소서낭배강,획득료ES세포충계감합체;대고감합도소서여C57BL/6J적자대소서진행기인형감정,성공지획득료Smad2조건기인타파소서.
