生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2003年
3期
272-276
,共5页
刘银星%熊冬生%范冬梅%邵晓枫%许元富%朱祯平%杨纯正
劉銀星%熊鼕生%範鼕梅%邵曉楓%許元富%硃禎平%楊純正
류은성%웅동생%범동매%소효풍%허원부%주정평%양순정
单克隆抗体%嵌合抗体Fab′片段%CD20%随机突变
單剋隆抗體%嵌閤抗體Fab′片段%CD20%隨機突變
단극륭항체%감합항체Fab′편단%CD20%수궤돌변
利用PCR方法从抗CD20单链抗体(ScFv)表达载体上扩增抗CD20抗体轻链可变区基因(VL)、重链可变区基因(VH),同时在抗体的可变区引入突变,然后将VH、VL基因重组到Fab′表达载体pYZF1中,构建抗CD20嵌合抗体Fab′片段表达载体,并在大肠杆菌16c9中进行高效可溶性分泌表达.经大量的筛选,获得一个产量和活性均有所提高的突变克隆.其突变位点在轻链可变区的CDR1区,即G77→A(Ser→Asn).突变的抗体的表达量为每克干菌3.8 mg,而未突变抗体的表达量为每克干菌1.3 mg.突变体的亲和力常数Ka为2.2×109 L/mol,约为突变前的2倍.竞争性免疫荧光抑制实验表明,突变的Fab′片段能竞争性抑制鼠源性抗CD20抗体HI47和CD20表达细胞Raji细胞的结合,使HI47的结合阳性率由98%下降至37.55%,体外细胞生长抑制试验亦证明突变的Fab′片段的抑制活性明显高于未突变的抗体.
利用PCR方法從抗CD20單鏈抗體(ScFv)錶達載體上擴增抗CD20抗體輕鏈可變區基因(VL)、重鏈可變區基因(VH),同時在抗體的可變區引入突變,然後將VH、VL基因重組到Fab′錶達載體pYZF1中,構建抗CD20嵌閤抗體Fab′片段錶達載體,併在大腸桿菌16c9中進行高效可溶性分泌錶達.經大量的篩選,穫得一箇產量和活性均有所提高的突變剋隆.其突變位點在輕鏈可變區的CDR1區,即G77→A(Ser→Asn).突變的抗體的錶達量為每剋榦菌3.8 mg,而未突變抗體的錶達量為每剋榦菌1.3 mg.突變體的親和力常數Ka為2.2×109 L/mol,約為突變前的2倍.競爭性免疫熒光抑製實驗錶明,突變的Fab′片段能競爭性抑製鼠源性抗CD20抗體HI47和CD20錶達細胞Raji細胞的結閤,使HI47的結閤暘性率由98%下降至37.55%,體外細胞生長抑製試驗亦證明突變的Fab′片段的抑製活性明顯高于未突變的抗體.
이용PCR방법종항CD20단련항체(ScFv)표체재체상확증항CD20항체경련가변구기인(VL)、중련가변구기인(VH),동시재항체적가변구인입돌변,연후장VH、VL기인중조도Fab′표체재체pYZF1중,구건항CD20감합항체Fab′편단표체재체,병재대장간균16c9중진행고효가용성분비표체.경대량적사선,획득일개산량화활성균유소제고적돌변극륭.기돌변위점재경련가변구적CDR1구,즉G77→A(Ser→Asn).돌변적항체적표체량위매극간균3.8 mg,이미돌변항체적표체량위매극간균1.3 mg.돌변체적친화력상수Ka위2.2×109 L/mol,약위돌변전적2배.경쟁성면역형광억제실험표명,돌변적Fab′편단능경쟁성억제서원성항CD20항체HI47화CD20표체세포Raji세포적결합,사HI47적결합양성솔유98%하강지37.55%,체외세포생장억제시험역증명돌변적Fab′편단적억제활성명현고우미돌변적항체.
