遗传学报
遺傳學報
유전학보
ACTA GENETICA SINICA
2000年
4期
361-368
,共8页
袁有忠%赵思汇%周宗祥%季朝能%盛小禹%毛裕民
袁有忠%趙思彙%週宗祥%季朝能%盛小禹%毛裕民
원유충%조사회%주종상%계조능%성소우%모유민
耐热碱性磷酸酯酶%随机诱变%氨基酸置换
耐熱堿性燐痠酯酶%隨機誘變%氨基痠置換
내열감성린산지매%수궤유변%안기산치환
为了进一步揭示蛋白质的耐热机制,对含有耐热碱性磷酸酯酶(FD-TAP)的表达质粒pTAP503F进行了随机诱变,用菌落原位显色法从约5000个转化子中筛选到4个耐热性下降的突变型克隆,并对其中1个克隆(TAPM3)进行了部分酶学性质、DNA和氨基酸序列的研究.酶学性质研究表明,与野生型相比,该突变型酶的耐热性有较大幅度的下降,而热激活性无明显改变.DNA序列分析表明在1 239位TAPM3发生GA转换,导致427位的甘氨酸变为丝氨酸(G427S),这种突变对酶的耐热性、米氏常数、活化能影响较为明显.这说明只须1个氨基酸置换就会对蛋白质耐热性变化起巨大作用,并且氨基酸残基侧链的大小、电荷等能使蛋白质结构松散的性质,会导致蛋白质耐热性下降.
為瞭進一步揭示蛋白質的耐熱機製,對含有耐熱堿性燐痠酯酶(FD-TAP)的錶達質粒pTAP503F進行瞭隨機誘變,用菌落原位顯色法從約5000箇轉化子中篩選到4箇耐熱性下降的突變型剋隆,併對其中1箇剋隆(TAPM3)進行瞭部分酶學性質、DNA和氨基痠序列的研究.酶學性質研究錶明,與野生型相比,該突變型酶的耐熱性有較大幅度的下降,而熱激活性無明顯改變.DNA序列分析錶明在1 239位TAPM3髮生GA轉換,導緻427位的甘氨痠變為絲氨痠(G427S),這種突變對酶的耐熱性、米氏常數、活化能影響較為明顯.這說明隻鬚1箇氨基痠置換就會對蛋白質耐熱性變化起巨大作用,併且氨基痠殘基側鏈的大小、電荷等能使蛋白質結構鬆散的性質,會導緻蛋白質耐熱性下降.
위료진일보게시단백질적내열궤제,대함유내열감성린산지매(FD-TAP)적표체질립pTAP503F진행료수궤유변,용균락원위현색법종약5000개전화자중사선도4개내열성하강적돌변형극륭,병대기중1개극륭(TAPM3)진행료부분매학성질、DNA화안기산서렬적연구.매학성질연구표명,여야생형상비,해돌변형매적내열성유교대폭도적하강,이열격활성무명현개변.DNA서렬분석표명재1 239위TAPM3발생GA전환,도치427위적감안산변위사안산(G427S),저충돌변대매적내열성、미씨상수、활화능영향교위명현.저설명지수1개안기산치환취회대단백질내열성변화기거대작용,병차안기산잔기측련적대소、전하등능사단백질결구송산적성질,회도치단백질내열성하강.
