第二军医大学学报
第二軍醫大學學報
제이군의대학학보
ACADEMIC JOURNAL OF SECOND MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
1999年
10期
777-779
,共3页
顾洪%蔡在龙%陈少萍%邹鲁峰%宋春桥%毛积芳
顧洪%蔡在龍%陳少萍%鄒魯峰%宋春橋%毛積芳
고홍%채재룡%진소평%추로봉%송춘교%모적방
血管内皮细胞生长因子%哺乳动物%表达
血管內皮細胞生長因子%哺乳動物%錶達
혈관내피세포생장인자%포유동물%표체
目的:本实验试图构建具有生物学活性的VEGF真核表达载体,为VEGF基因治疗提供载体.方法:将已获得的hVEGF165 cDNA克隆到GST融合表达载体,构建原核表达质粒,转染大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达,Western blot鉴定表达产物.在此基础上构建真核表达载体pcDNA3/hVEGF165,脂质体介导转染CHO-K1细胞,G-418筛选,Northern blot,Western blot分别检测其在细胞内的转录和表达情况,3H-TdR掺入法检测表达蛋白的活性.结果:实验组的Northern blot和Western blot出现特异性条带,而对照组在相应部位未出现条带.实验组的大鼠心肌血管内皮细胞3H-TdR掺入率明显高于对照组(P<0.001).结论:本实验所构建的VEGF真核表达质粒能够在真核细胞内获得表达,其表达产物具有血管内皮细胞增殖刺激活性.
目的:本實驗試圖構建具有生物學活性的VEGF真覈錶達載體,為VEGF基因治療提供載體.方法:將已穫得的hVEGF165 cDNA剋隆到GST融閤錶達載體,構建原覈錶達質粒,轉染大腸桿菌DH5α,IPTG誘導錶達,Western blot鑒定錶達產物.在此基礎上構建真覈錶達載體pcDNA3/hVEGF165,脂質體介導轉染CHO-K1細胞,G-418篩選,Northern blot,Western blot分彆檢測其在細胞內的轉錄和錶達情況,3H-TdR摻入法檢測錶達蛋白的活性.結果:實驗組的Northern blot和Western blot齣現特異性條帶,而對照組在相應部位未齣現條帶.實驗組的大鼠心肌血管內皮細胞3H-TdR摻入率明顯高于對照組(P<0.001).結論:本實驗所構建的VEGF真覈錶達質粒能夠在真覈細胞內穫得錶達,其錶達產物具有血管內皮細胞增殖刺激活性.
목적:본실험시도구건구유생물학활성적VEGF진핵표체재체,위VEGF기인치료제공재체.방법:장이획득적hVEGF165 cDNA극륭도GST융합표체재체,구건원핵표체질립,전염대장간균DH5α,IPTG유도표체,Western blot감정표체산물.재차기출상구건진핵표체재체pcDNA3/hVEGF165,지질체개도전염CHO-K1세포,G-418사선,Northern blot,Western blot분별검측기재세포내적전록화표체정황,3H-TdR참입법검측표체단백적활성.결과:실험조적Northern blot화Western blot출현특이성조대,이대조조재상응부위미출현조대.실험조적대서심기혈관내피세포3H-TdR참입솔명현고우대조조(P<0.001).결론:본실험소구건적VEGF진핵표체질립능구재진핵세포내획득표체,기표체산물구유혈관내피세포증식자격활성.
