浙江大学学报(医学版)
浙江大學學報(醫學版)
절강대학학보(의학판)
JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2003年
1期
17-20
,共4页
夏肖萍%严杰%钊守凤%毛亚飞%李淑萍
夏肖萍%嚴傑%釗守鳳%毛亞飛%李淑萍
하초평%엄걸%쇠수봉%모아비%리숙평
大肠杆菌%LTB基因%霍乱弧菌%CTB基因%碱基序列%克隆,分子%LTB融合蛋白/免疫学%CTB融合蛋白/免疫学
大腸桿菌%LTB基因%霍亂弧菌%CTB基因%堿基序列%剋隆,分子%LTB融閤蛋白/免疫學%CTB融閤蛋白/免疫學
대장간균%LTB기인%곽란호균%CTB기인%감기서렬%극륭,분자%LTB융합단백/면역학%CTB융합단백/면역학
目的:克隆大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)及霍乱弧菌肠毒素B亚单位(CTB)基因,构建其表达载体.方法:采用高保真PCR分别从E.coli 44815株与V.cholerae东74株基因组DNA中扩增LTB与CTB基因,T-A克隆后测定核苷酸序列.分别构建pET32a的LTB及CTB表达载体,在E.coli BL21DE3宿主菌中用不同浓度的IPTG诱导表达.采用SDS-PAGE及GM1-ELISA鉴定表达产物.结果:所克隆的LTB和CTB基因与报道的相应核苷酸序列同源性分别为99.12%～99.71%和98.54%～99.42%,氨基酸序列同源性分别高达97.58%～99.19%和96.77%～99.19%.pET32a-LTB-BL21DE3和pET32a-CTB-BL21DE3系统表达的融合蛋白产量分别占细菌总蛋白的30%和10%左右.GM1-ELISA结果证实LTB及CTB融合蛋白均能与牛GM1结合.结论:本研究成功地构建了LTB与CTB表达系统,所表达的LTB与CTB融合蛋白具有粘膜免疫佐剂活性.
目的:剋隆大腸桿菌不耐熱腸毒素B亞單位(LTB)及霍亂弧菌腸毒素B亞單位(CTB)基因,構建其錶達載體.方法:採用高保真PCR分彆從E.coli 44815株與V.cholerae東74株基因組DNA中擴增LTB與CTB基因,T-A剋隆後測定覈苷痠序列.分彆構建pET32a的LTB及CTB錶達載體,在E.coli BL21DE3宿主菌中用不同濃度的IPTG誘導錶達.採用SDS-PAGE及GM1-ELISA鑒定錶達產物.結果:所剋隆的LTB和CTB基因與報道的相應覈苷痠序列同源性分彆為99.12%～99.71%和98.54%～99.42%,氨基痠序列同源性分彆高達97.58%～99.19%和96.77%～99.19%.pET32a-LTB-BL21DE3和pET32a-CTB-BL21DE3繫統錶達的融閤蛋白產量分彆佔細菌總蛋白的30%和10%左右.GM1-ELISA結果證實LTB及CTB融閤蛋白均能與牛GM1結閤.結論:本研究成功地構建瞭LTB與CTB錶達繫統,所錶達的LTB與CTB融閤蛋白具有粘膜免疫佐劑活性.
목적:극륭대장간균불내열장독소B아단위(LTB)급곽란호균장독소B아단위(CTB)기인,구건기표체재체.방법:채용고보진PCR분별종E.coli 44815주여V.cholerae동74주기인조DNA중확증LTB여CTB기인,T-A극륭후측정핵감산서렬.분별구건pET32a적LTB급CTB표체재체,재E.coli BL21DE3숙주균중용불동농도적IPTG유도표체.채용SDS-PAGE급GM1-ELISA감정표체산물.결과:소극륭적LTB화CTB기인여보도적상응핵감산서렬동원성분별위99.12%～99.71%화98.54%～99.42%,안기산서렬동원성분별고체97.58%～99.19%화96.77%～99.19%.pET32a-LTB-BL21DE3화pET32a-CTB-BL21DE3계통표체적융합단백산량분별점세균총단백적30%화10%좌우.GM1-ELISA결과증실LTB급CTB융합단백균능여우GM1결합.결론:본연구성공지구건료LTB여CTB표체계통,소표체적LTB여CTB융합단백구유점막면역좌제활성.
