CAJ | 학술논문

背景与目的:γ干扰素(interferon-γ,IFNγ)具有直接促进某些肿瘤细胞凋亡和调节细胞免疫的功能,因此在肿瘤的基因治疗中IFNγ将发挥重要的作用.本研究构建携带人IFNγ cDNA的重组腺病毒,并检测它在真核细胞中的表达.方法:用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RTPCR)从人外周血单个核细胞中扩增出IFNγ的cDNA全长序列,插入腺病毒穿梭质粒pShuttle,经酶切和DNA测序鉴定,然后用体外连接法构建重组腺病毒Ad-IFNγ.用所构建的重组Ad-IFNγ感染HepG2细胞,通过RT-PCR和免疫组织化学法检测IFNγ的表达.结果:经测序,克隆的人IFNγcDNA序列与GenBank上公布的序列完全一致;Ad-IFNγ感染的HepG2细胞在转录和翻译水平均有IFNγ的表达.结论:体外连接法是一种简便易行的重组腺病毒载体构建方法;所构建的重组腺病毒Ad-IFNγ能表达IFNγ蛋白,可用于抗肿瘤和抗病毒等细胞及动物实验.
배경여목적:γ간우소(interferon-γ,IFNγ)구유직접촉진모사종류세포조망화조절세포면역적공능,인차재종류적기인치료중IFNγ장발휘중요적작용.본연구구건휴대인IFNγ cDNA적중조선병독,병검측타재진핵세포중적표체.방법:용역전록취합매련반응(reverse transcription-polymerase chain reaction,RTPCR)종인외주혈단개핵세포중확증출IFNγ적cDNA전장서렬,삽입선병독천사질립pShuttle,경매절화DNA측서감정,연후용체외련접법구건중조선병독Ad-IFNγ.용소구건적중조Ad-IFNγ감염HepG2세포,통과RT-PCR화면역조직화학법검측IFNγ적표체.결과:경측서,극륭적인IFNγcDNA서렬여GenBank상공포적서렬완전일치;Ad-IFNγ감염적HepG2세포재전록화번역수평균유IFNγ적표체.결론:체외련접법시일충간편역행적중조선병독재체구건방법;소구건적중조선병독Ad-IFNγ능표체IFNγ단백,가용우항종류화항병독등세포급동물실험.