中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2008年
6期
492-495
,共4页
穿孔素%颗粒酶B%共表达%间接免疫荧光
穿孔素%顆粒酶B%共錶達%間接免疫熒光
천공소%과립매B%공표체%간접면역형광
目的:体外扩增出PFP、GrB基因的全片段并构建共表达重组体pVAX1-PIG(即 pVAX1-PFP-IRES-GrB),分析其在人喉癌细胞Hep-2中的表达情况.方法:利用RT-PCR的方法从人的喉癌组织浸润淋巴细胞中扩增全长PFP、GrB的cDNA片段并构建共表达重组体pVAX1-PIG.利用脂质体LipofectamineTM2000将重组真核表达载体pVAX1-PIG转染入人的Hep-2细胞株中,采用RT-PCR、间接免疫荧光法分析其在人Hep-2中的表达情况.结果:经双酶切、测序法证实已成功扩增PFP、GrB基因的全长cDNA,并构建共表达重组体pVAX1-PIG,在荧光显微镜下可见已转染pVAX1-PIG的人Hep-2细胞的胞浆发出苹果绿色荧光.结论:成功扩增PFP、GrB全片段、构建共表达重组体pVAX1-PIG,并在人Hep-2细胞中检测到PFP、GrB蛋白的表达,穿孔素(PFP)/颗粒酶B共同表达能够介导细胞的凋亡,为其在喉癌治疗中的应用研究奠定了基础.
目的:體外擴增齣PFP、GrB基因的全片段併構建共錶達重組體pVAX1-PIG(即 pVAX1-PFP-IRES-GrB),分析其在人喉癌細胞Hep-2中的錶達情況.方法:利用RT-PCR的方法從人的喉癌組織浸潤淋巴細胞中擴增全長PFP、GrB的cDNA片段併構建共錶達重組體pVAX1-PIG.利用脂質體LipofectamineTM2000將重組真覈錶達載體pVAX1-PIG轉染入人的Hep-2細胞株中,採用RT-PCR、間接免疫熒光法分析其在人Hep-2中的錶達情況.結果:經雙酶切、測序法證實已成功擴增PFP、GrB基因的全長cDNA,併構建共錶達重組體pVAX1-PIG,在熒光顯微鏡下可見已轉染pVAX1-PIG的人Hep-2細胞的胞漿髮齣蘋果綠色熒光.結論:成功擴增PFP、GrB全片段、構建共錶達重組體pVAX1-PIG,併在人Hep-2細胞中檢測到PFP、GrB蛋白的錶達,穿孔素(PFP)/顆粒酶B共同錶達能夠介導細胞的凋亡,為其在喉癌治療中的應用研究奠定瞭基礎.
목적:체외확증출PFP、GrB기인적전편단병구건공표체중조체pVAX1-PIG(즉 pVAX1-PFP-IRES-GrB),분석기재인후암세포Hep-2중적표체정황.방법:이용RT-PCR적방법종인적후암조직침윤림파세포중확증전장PFP、GrB적cDNA편단병구건공표체중조체pVAX1-PIG.이용지질체LipofectamineTM2000장중조진핵표체재체pVAX1-PIG전염입인적Hep-2세포주중,채용RT-PCR、간접면역형광법분석기재인Hep-2중적표체정황.결과:경쌍매절、측서법증실이성공확증PFP、GrB기인적전장cDNA,병구건공표체중조체pVAX1-PIG,재형광현미경하가견이전염pVAX1-PIG적인Hep-2세포적포장발출평과록색형광.결론:성공확증PFP、GrB전편단、구건공표체중조체pVAX1-PIG,병재인Hep-2세포중검측도PFP、GrB단백적표체,천공소(PFP)/과립매B공동표체능구개도세포적조망,위기재후암치료중적응용연구전정료기출.
