医学分子生物学杂志
醫學分子生物學雜誌
의학분자생물학잡지
FOREIGN MEDICAL SCIENCES
2009年
1期
6-8
,共3页
李晓冬%方建飞%东莉洁%葛林%何津岩%杨洁
李曉鼕%方建飛%東莉潔%葛林%何津巖%楊潔
리효동%방건비%동리길%갈림%하진암%양길
hSnu114蛋白%重组质粒%融合蛋白
hSnu114蛋白%重組質粒%融閤蛋白
hSnu114단백%중조질립%융합단백
目的 将hSnu114基因定向连入pEGFP质粒GFP的下游,使hSnu114蛋白可与绿色荧光蛋白在真核细胞内融合表达.从而为进一步研究hSnu114蛋白的功能奠定实验基础.方法 本实验已经构建PTZ57R/T –hSnu114和pcDNA3.1(-)-hSnu114重组质粒,想要构建pEGFP-hSnu114重组质粒,需通过引入SalⅠ酶切位点,调整N端起始密码子与绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)基因之间的序列,使其不破坏读码框,融合蛋白正确表达.PCR扩增出hSnu114的第一部份 (SalⅠ～MunⅠ基因序列),从 hSnu114-pcDNA3.1(-)重组质粒回收hSnu114的第二部分(MunⅠ～BamHⅠ片段),定向克隆至T/A载体,构建hSnu114全长(SalⅠ～BamHⅠ)pTZ57R/T重组质粒.采用SalⅠ和BamHⅠ双酶切方法,从重组质粒中获得hSnu114全长,将该基因片段连接入pEGFP质粒.将构建成功的pEGFP-hSnu114质粒,转染入HeLa细胞,荧光显微镜下可观察绿色荧光蛋白表达.进行Western印迹检测.结果 ① hSnu114 SalⅠ～MunⅠ目的片段获取.②将该pEGFP-hSnu114质粒进行双酶切鉴定可见hSnu114全长片段.③转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达.④ Western印迹可检测到pEGFP-hSnu114融合蛋白.结论 ① hSnu114全长成功载入pEGFP质粒.② hSnu114蛋白可与绿色荧光蛋白在真核细胞中融合表达.
目的 將hSnu114基因定嚮連入pEGFP質粒GFP的下遊,使hSnu114蛋白可與綠色熒光蛋白在真覈細胞內融閤錶達.從而為進一步研究hSnu114蛋白的功能奠定實驗基礎.方法 本實驗已經構建PTZ57R/T –hSnu114和pcDNA3.1(-)-hSnu114重組質粒,想要構建pEGFP-hSnu114重組質粒,需通過引入SalⅠ酶切位點,調整N耑起始密碼子與綠色熒光蛋白(green fluorescence protein,GFP)基因之間的序列,使其不破壞讀碼框,融閤蛋白正確錶達.PCR擴增齣hSnu114的第一部份 (SalⅠ～MunⅠ基因序列),從 hSnu114-pcDNA3.1(-)重組質粒迴收hSnu114的第二部分(MunⅠ～BamHⅠ片段),定嚮剋隆至T/A載體,構建hSnu114全長(SalⅠ～BamHⅠ)pTZ57R/T重組質粒.採用SalⅠ和BamHⅠ雙酶切方法,從重組質粒中穫得hSnu114全長,將該基因片段連接入pEGFP質粒.將構建成功的pEGFP-hSnu114質粒,轉染入HeLa細胞,熒光顯微鏡下可觀察綠色熒光蛋白錶達.進行Western印跡檢測.結果 ① hSnu114 SalⅠ～MunⅠ目的片段穫取.②將該pEGFP-hSnu114質粒進行雙酶切鑒定可見hSnu114全長片段.③轉染重組質粒後可觀察到綠色熒光蛋白的錶達.④ Western印跡可檢測到pEGFP-hSnu114融閤蛋白.結論 ① hSnu114全長成功載入pEGFP質粒.② hSnu114蛋白可與綠色熒光蛋白在真覈細胞中融閤錶達.
목적 장hSnu114기인정향련입pEGFP질립GFP적하유,사hSnu114단백가여록색형광단백재진핵세포내융합표체.종이위진일보연구hSnu114단백적공능전정실험기출.방법 본실험이경구건PTZ57R/T –hSnu114화pcDNA3.1(-)-hSnu114중조질립,상요구건pEGFP-hSnu114중조질립,수통과인입SalⅠ매절위점,조정N단기시밀마자여록색형광단백(green fluorescence protein,GFP)기인지간적서렬,사기불파배독마광,융합단백정학표체.PCR확증출hSnu114적제일부빈 (SalⅠ～MunⅠ기인서렬),종 hSnu114-pcDNA3.1(-)중조질립회수hSnu114적제이부분(MunⅠ～BamHⅠ편단),정향극륭지T/A재체,구건hSnu114전장(SalⅠ～BamHⅠ)pTZ57R/T중조질립.채용SalⅠ화BamHⅠ쌍매절방법,종중조질립중획득hSnu114전장,장해기인편단련접입pEGFP질립.장구건성공적pEGFP-hSnu114질립,전염입HeLa세포,형광현미경하가관찰록색형광단백표체.진행Western인적검측.결과 ① hSnu114 SalⅠ～MunⅠ목적편단획취.②장해pEGFP-hSnu114질립진행쌍매절감정가견hSnu114전장편단.③전염중조질립후가관찰도록색형광단백적표체.④ Western인적가검측도pEGFP-hSnu114융합단백.결론 ① hSnu114전장성공재입pEGFP질립.② hSnu114단백가여록색형광단백재진핵세포중융합표체.
