鞍山师范学院学报
鞍山師範學院學報
안산사범학원학보
JOURNAL OF ANSHAN TEACHERS COLLEGE
2010年
2期
36-39
,共4页
邹德生%张博%张兰杰%辛广%李桂英
鄒德生%張博%張蘭傑%辛廣%李桂英
추덕생%장박%장란걸%신엄%리계영
人细胞周期蛋白D1%大肠杆菌分泌表达%纯化%大肠杆菌
人細胞週期蛋白D1%大腸桿菌分泌錶達%純化%大腸桿菌
인세포주기단백D1%대장간균분비표체%순화%대장간균
将人细胞周期蛋白D1基因克隆入原核表达栽体pET-20b中获得重组质粒pET-20b-cycD,经酶切鉴定正确后转化大肠杆菌BL21 PlaysS后获得表达菌株.该菌株经IPTG诱导后表达的目的蛋白有部分分泌到培养基上清中,将培养基上清中的蛋白沉淀后用Ni2+螯合柱进行纯化,最后可得到纯度达到95%以上的目的蛋白.蛋白电泳显示纯化蛋白的分子量约为33 KD,Westemblot分析表明,在电泳胶的相应分子量处出现特异性条带,说明已经成功表达和纯化了重组人细胞周期蛋白D1.
將人細胞週期蛋白D1基因剋隆入原覈錶達栽體pET-20b中穫得重組質粒pET-20b-cycD,經酶切鑒定正確後轉化大腸桿菌BL21 PlaysS後穫得錶達菌株.該菌株經IPTG誘導後錶達的目的蛋白有部分分泌到培養基上清中,將培養基上清中的蛋白沉澱後用Ni2+螯閤柱進行純化,最後可得到純度達到95%以上的目的蛋白.蛋白電泳顯示純化蛋白的分子量約為33 KD,Westemblot分析錶明,在電泳膠的相應分子量處齣現特異性條帶,說明已經成功錶達和純化瞭重組人細胞週期蛋白D1.
장인세포주기단백D1기인극륭입원핵표체재체pET-20b중획득중조질립pET-20b-cycD,경매절감정정학후전화대장간균BL21 PlaysS후획득표체균주.해균주경IPTG유도후표체적목적단백유부분분비도배양기상청중,장배양기상청중적단백침정후용Ni2+오합주진행순화,최후가득도순도체도95%이상적목적단백.단백전영현시순화단백적분자량약위33 KD,Westemblot분석표명,재전영효적상응분자량처출현특이성조대,설명이경성공표체화순화료중조인세포주기단백D1.
