微生物与感染
微生物與感染
미생물여감염
JOURNAL OF MICROBES AND INFECTION
2010年
3期
140-145
,共6页
陈辉%高娜%范东瀛%郑群%王娟%安静
陳輝%高娜%範東瀛%鄭群%王娟%安靜
진휘%고나%범동영%정군%왕연%안정
丙型肝炎病毒%核心蛋白%原核表达%抗体制备
丙型肝炎病毒%覈心蛋白%原覈錶達%抗體製備
병형간염병독%핵심단백%원핵표체%항체제비
本文旨在获得纯化丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白(HCV-C)及抗HCV-C多克隆抗体,为深入研究HCV-C与肝细胞相互作用的分子机制奠定基础.首先以HCV1b亚型HC-J4-91全基因组质粒为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增HCV-C基因,构建重组质粒pQE31-HCV-C.融合蛋白经原核表达、纯化后,免疫BALB/c小鼠,制备抗HCV-C多克隆抗体.利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗体效价,蛋白免疫印迹(Western blot)和间接免疫荧光染色鉴定抗体特异性.结果显示,表达HCV-C的原核表达质粒pQE31-HCV-C构建正确,获得相对分子质量约22000的纯化融合蛋白.ELISA检测重组蛋白免疫小鼠的抗血清效价达1∶12800.结果显示,自制的抗HCV-C多克隆抗体能特异性识别HCV-C.本研究获得了纯度较好、原核表达的HCV-C,并成功制备了抗HCV-C多克隆抗体,为深入研究HCV-C的致病机制提供了有实用价值的研究工具.
本文旨在穫得純化丙型肝炎病毒(HCV)覈心蛋白(HCV-C)及抗HCV-C多剋隆抗體,為深入研究HCV-C與肝細胞相互作用的分子機製奠定基礎.首先以HCV1b亞型HC-J4-91全基因組質粒為模闆,聚閤酶鏈反應(PCR)擴增HCV-C基因,構建重組質粒pQE31-HCV-C.融閤蛋白經原覈錶達、純化後,免疫BALB/c小鼠,製備抗HCV-C多剋隆抗體.利用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測抗體效價,蛋白免疫印跡(Western blot)和間接免疫熒光染色鑒定抗體特異性.結果顯示,錶達HCV-C的原覈錶達質粒pQE31-HCV-C構建正確,穫得相對分子質量約22000的純化融閤蛋白.ELISA檢測重組蛋白免疫小鼠的抗血清效價達1∶12800.結果顯示,自製的抗HCV-C多剋隆抗體能特異性識彆HCV-C.本研究穫得瞭純度較好、原覈錶達的HCV-C,併成功製備瞭抗HCV-C多剋隆抗體,為深入研究HCV-C的緻病機製提供瞭有實用價值的研究工具.
본문지재획득순화병형간염병독(HCV)핵심단백(HCV-C)급항HCV-C다극륭항체,위심입연구HCV-C여간세포상호작용적분자궤제전정기출.수선이HCV1b아형HC-J4-91전기인조질립위모판,취합매련반응(PCR)확증HCV-C기인,구건중조질립pQE31-HCV-C.융합단백경원핵표체、순화후,면역BALB/c소서,제비항HCV-C다극륭항체.이용매련면역흡부시험(ELISA)검측항체효개,단백면역인적(Western blot)화간접면역형광염색감정항체특이성.결과현시,표체HCV-C적원핵표체질립pQE31-HCV-C구건정학,획득상대분자질량약22000적순화융합단백.ELISA검측중조단백면역소서적항혈청효개체1∶12800.결과현시,자제적항HCV-C다극륭항체능특이성식별HCV-C.본연구획득료순도교호、원핵표체적HCV-C,병성공제비료항HCV-C다극륭항체,위심입연구HCV-C적치병궤제제공료유실용개치적연구공구.
