CAJ | 학술논문

背景:各种磷酸化蛋白质表达水平对人胚胎干细胞维持未分化状态或定向分化的影响逐渐成为人胚胎干细胞的研究热点,研究发现磷酸化蛋白质表达水平可能决定着人胚胎干细胞的命运.目的:对PI3K/Akt途径下游的关键蛋白磷酸化水平进行检测,寻找PI3K/Akt途径中能够维持人胚胎干细胞未分化状态的下游蛋白.方法:用胎鼠成纤维细胞作为饲养层,二维培养的方法培养人胚胎干细胞,胶原酶消化后待测;以饲养层细胞、K562细胞株为对照.观察人胚胎干细胞生长状态;RT-PCR检测Pten基因表达;Western Blot检测p-PTEN、p-mTOR、p-P70S6K、p-4E-BP1 4种蛋白的表达.结果与结论:人胚胎干细胞在未分化状态时Pten mRNA表达高于肿瘤细胞K562,而且Pten抑制的mTOR信号通路中关键蛋白表达均明显低于K562,尤其以p-4E-BP1表达最低.提示PI3K/Akt/mTOR信号通路下游磷酸化蛋白在人胚胎干细胞活性较低,如果抑制负调节蛋白PTEN或直接激活该通路正调节关键蛋白,可能会加快人胚胎干细胞增殖、减少凋亡,进而为定向分化、再生医学提供更多的细胞来源.
배경:각충린산화단백질표체수평대인배태간세포유지미분화상태혹정향분화적영향축점성위인배태간세포적연구열점,연구발현린산화단백질표체수평가능결정착인배태간세포적명운.목적:대PI3K/Akt도경하유적관건단백린산화수평진행검측,심조PI3K/Akt도경중능구유지인배태간세포미분화상태적하유단백.방법:용태서성섬유세포작위사양층,이유배양적방법배양인배태간세포,효원매소화후대측;이사양층세포、K562세포주위대조.관찰인배태간세포생장상태;RT-PCR검측Pten기인표체;Western Blot검측p-PTEN、p-mTOR、p-P70S6K、p-4E-BP1 4충단백적표체.결과여결론:인배태간세포재미분화상태시Pten mRNA표체고우종류세포K562,이차Pten억제적mTOR신호통로중관건단백표체균명현저우K562,우기이p-4E-BP1표체최저.제시PI3K/Akt/mTOR신호통로하유린산화단백재인배태간세포활성교저,여과억제부조절단백PTEN혹직접격활해통로정조절관건단백,가능회가쾌인배태간세포증식、감소조망,진이위정향분화、재생의학제공경다적세포래원.