生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2012年
8期
181-188
,共8页
HDAC6%昆虫表达系统%小分子抑制剂%高通量筛选
HDAC6%昆蟲錶達繫統%小分子抑製劑%高通量篩選
HDAC6%곤충표체계통%소분자억제제%고통량사선
旨在建立分子水平HDAC6小分子抑制剂的高通量筛选模型,用于新型HDAC6特异性小分子抑制剂的发现.建立HDAC6的昆虫表达系统,分离纯化HDAC6蛋白,利用底物Boc-Lys( Ac) -AMC对纯化的HDAC6进行测活,并对测活体系进行优化,以SAHA为阳性抑制剂,确定适合高通量筛选的酶及底物浓度,反应时间等.首先构建HDAC6昆虫真核细胞表达载体,转入昆虫细胞中表达,并利用GST亲和柱纯化获得较高纯度的GST-HDAC6融合蛋白;建立体外HDAC6分子测活方法,表明昆虫表达的GST-HDAC6融合蛋白具有去乙酰化酶活性,并通过对多种参数优化使得Z'因子达到0.60,表明分子水平的HDAC6小分子抑制剂高通量筛选体系成功建立.
旨在建立分子水平HDAC6小分子抑製劑的高通量篩選模型,用于新型HDAC6特異性小分子抑製劑的髮現.建立HDAC6的昆蟲錶達繫統,分離純化HDAC6蛋白,利用底物Boc-Lys( Ac) -AMC對純化的HDAC6進行測活,併對測活體繫進行優化,以SAHA為暘性抑製劑,確定適閤高通量篩選的酶及底物濃度,反應時間等.首先構建HDAC6昆蟲真覈細胞錶達載體,轉入昆蟲細胞中錶達,併利用GST親和柱純化穫得較高純度的GST-HDAC6融閤蛋白;建立體外HDAC6分子測活方法,錶明昆蟲錶達的GST-HDAC6融閤蛋白具有去乙酰化酶活性,併通過對多種參數優化使得Z'因子達到0.60,錶明分子水平的HDAC6小分子抑製劑高通量篩選體繫成功建立.
지재건립분자수평HDAC6소분자억제제적고통량사선모형,용우신형HDAC6특이성소분자억제제적발현.건립HDAC6적곤충표체계통,분리순화HDAC6단백,이용저물Boc-Lys( Ac) -AMC대순화적HDAC6진행측활,병대측활체계진행우화,이SAHA위양성억제제,학정괄합고통량사선적매급저물농도,반응시간등.수선구건HDAC6곤충진핵세포표체재체,전입곤충세포중표체,병이용GST친화주순화획득교고순도적GST-HDAC6융합단백;건입체외HDAC6분자측활방법,표명곤충표체적GST-HDAC6융합단백구유거을선화매활성,병통과대다충삼수우화사득Z'인자체도0.60,표명분자수평적HDAC6소분자억제제고통량사선체계성공건립.
