中华心血管病杂志
中華心血管病雜誌
중화심혈관병잡지
Chinese Journal of Cardiology
2010年
10期
923-928
,共6页
动脉粥样硬化%丝裂原激活蛋白激酶类%脂蛋白相关磷脂酶A2%辛伐他汀
動脈粥樣硬化%絲裂原激活蛋白激酶類%脂蛋白相關燐脂酶A2%辛伐他汀
동맥죽양경화%사렬원격활단백격매류%지단백상관린지매A2%신벌타정
Atherosclerosis%Mitogen-activated protein kinases%Lipoprotein associated phospholipase A2%Simvastatin
目的 观察辛伐他汀对人外周血单核巨噬细胞脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)表达的影响,并探讨其调控机制.方法 分离培养人外周血单核巨噬细胞,实验分为脂多糖(LPS)组、辛伐他汀组和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)干预组.LPS组:分别用不同浓度(0、1、10、102、103和104ng/ml)的LPS与细胞共同孵育6 h,观察不同浓度的辛伐他汀对LPS诱导的Lp-PLA2 mRNA和蛋白表达的影响;并用1μg/ml的LPS与细胞孵育不同时间(0、6、12、24和48 h),观察辛伐他汀作用不同时间对LPS诱导的Lp-PLA2 mRNA和蛋白表达的影响.辛伐他汀组:1 μg/ml的LPS+不同浓度的辛伐他汀(10-2～10-7mmol/L)与单核巨噬细胞共同孵育24 h,1 μg/ml LPS+10-3mmol/L的辛伐他汀与单核巨噬细胞孵育不同时间(0、6、24、24和48 h),观察辛伐他汀对LPS诱导的Lp-PLA2mRNA和蛋白表达及酶活性的影响.MAPK组:分别用10 μmol/L的p38抑制剂SB203580、20 μmol/L的ERK抑制剂U0126和20 μmol/L的JNK抑制剂SP600125预处理30 min后,将单核巨噬细胞与1μg/ml的LPS共同孵育24 h,观察MAPK信号通路在LPS介导的Lp-PLA2表达中的作用.逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)方法 检测Lp-PLA2 mRNA表达,比色法测定酶活性,Western blot方法 检测Lp-PLA2蛋白表达以及p38-MAPK蛋白及磷酸化水平.结果 (1)0.1μg/ml的LPS刺激6 h即可显著增加单核巨噬细胞Lp-PLA2 mRNA和蛋白的表达及其酶活性,并且随LPS浓度的增加和刺激时间的延长,该作用增强.(2)辛伐他汀可以明显抑制LPS诱导的Lp-PLA2的表达增加,并且降低酶活性,该作用呈浓度及时间依赖性.(3)辛伐他汀抑制LPS诱导的p38MAPK蛋白活化,p38MAPK的抑制剂SB203580可以完全阻断LPS介导的Lp-PLA2蛋白表达增加,与辛伐他汀作用相似.而MEK1/2的抑制剂U0126和JNK的抑制剂SP600125对LPS介导的Lp-PLA2蛋白表达的增加没有影响.结论 在培养的人外周血单核巨噬细胞中,辛伐他汀可以明显抑制LPS诱导的Lp-PLA2 mRNA和蛋白表达,降低Lp-PLA2酶活性,该作用至少部分由抑制p38MAPK信号转导通路介导.
目的 觀察辛伐他汀對人外週血單覈巨噬細胞脂蛋白相關燐脂酶A2(Lp-PLA2)錶達的影響,併探討其調控機製.方法 分離培養人外週血單覈巨噬細胞,實驗分為脂多糖(LPS)組、辛伐他汀組和絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)榦預組.LPS組:分彆用不同濃度(0、1、10、102、103和104ng/ml)的LPS與細胞共同孵育6 h,觀察不同濃度的辛伐他汀對LPS誘導的Lp-PLA2 mRNA和蛋白錶達的影響;併用1μg/ml的LPS與細胞孵育不同時間(0、6、12、24和48 h),觀察辛伐他汀作用不同時間對LPS誘導的Lp-PLA2 mRNA和蛋白錶達的影響.辛伐他汀組:1 μg/ml的LPS+不同濃度的辛伐他汀(10-2～10-7mmol/L)與單覈巨噬細胞共同孵育24 h,1 μg/ml LPS+10-3mmol/L的辛伐他汀與單覈巨噬細胞孵育不同時間(0、6、24、24和48 h),觀察辛伐他汀對LPS誘導的Lp-PLA2mRNA和蛋白錶達及酶活性的影響.MAPK組:分彆用10 μmol/L的p38抑製劑SB203580、20 μmol/L的ERK抑製劑U0126和20 μmol/L的JNK抑製劑SP600125預處理30 min後,將單覈巨噬細胞與1μg/ml的LPS共同孵育24 h,觀察MAPK信號通路在LPS介導的Lp-PLA2錶達中的作用.逆轉錄-多聚酶鏈反應(RT-PCR)方法 檢測Lp-PLA2 mRNA錶達,比色法測定酶活性,Western blot方法 檢測Lp-PLA2蛋白錶達以及p38-MAPK蛋白及燐痠化水平.結果 (1)0.1μg/ml的LPS刺激6 h即可顯著增加單覈巨噬細胞Lp-PLA2 mRNA和蛋白的錶達及其酶活性,併且隨LPS濃度的增加和刺激時間的延長,該作用增彊.(2)辛伐他汀可以明顯抑製LPS誘導的Lp-PLA2的錶達增加,併且降低酶活性,該作用呈濃度及時間依賴性.(3)辛伐他汀抑製LPS誘導的p38MAPK蛋白活化,p38MAPK的抑製劑SB203580可以完全阻斷LPS介導的Lp-PLA2蛋白錶達增加,與辛伐他汀作用相似.而MEK1/2的抑製劑U0126和JNK的抑製劑SP600125對LPS介導的Lp-PLA2蛋白錶達的增加沒有影響.結論 在培養的人外週血單覈巨噬細胞中,辛伐他汀可以明顯抑製LPS誘導的Lp-PLA2 mRNA和蛋白錶達,降低Lp-PLA2酶活性,該作用至少部分由抑製p38MAPK信號轉導通路介導.
목적 관찰신벌타정대인외주혈단핵거서세포지단백상관린지매A2(Lp-PLA2)표체적영향,병탐토기조공궤제.방법 분리배양인외주혈단핵거서세포,실험분위지다당(LPS)조、신벌타정조화사렬원활화단백격매(MAPK)간예조.LPS조:분별용불동농도(0、1、10、102、103화104ng/ml)적LPS여세포공동부육6 h,관찰불동농도적신벌타정대LPS유도적Lp-PLA2 mRNA화단백표체적영향;병용1μg/ml적LPS여세포부육불동시간(0、6、12、24화48 h),관찰신벌타정작용불동시간대LPS유도적Lp-PLA2 mRNA화단백표체적영향.신벌타정조:1 μg/ml적LPS+불동농도적신벌타정(10-2～10-7mmol/L)여단핵거서세포공동부육24 h,1 μg/ml LPS+10-3mmol/L적신벌타정여단핵거서세포부육불동시간(0、6、24、24화48 h),관찰신벌타정대LPS유도적Lp-PLA2mRNA화단백표체급매활성적영향.MAPK조:분별용10 μmol/L적p38억제제SB203580、20 μmol/L적ERK억제제U0126화20 μmol/L적JNK억제제SP600125예처리30 min후,장단핵거서세포여1μg/ml적LPS공동부육24 h,관찰MAPK신호통로재LPS개도적Lp-PLA2표체중적작용.역전록-다취매련반응(RT-PCR)방법 검측Lp-PLA2 mRNA표체,비색법측정매활성,Western blot방법 검측Lp-PLA2단백표체이급p38-MAPK단백급린산화수평.결과 (1)0.1μg/ml적LPS자격6 h즉가현저증가단핵거서세포Lp-PLA2 mRNA화단백적표체급기매활성,병차수LPS농도적증가화자격시간적연장,해작용증강.(2)신벌타정가이명현억제LPS유도적Lp-PLA2적표체증가,병차강저매활성,해작용정농도급시간의뢰성.(3)신벌타정억제LPS유도적p38MAPK단백활화,p38MAPK적억제제SB203580가이완전조단LPS개도적Lp-PLA2단백표체증가,여신벌타정작용상사.이MEK1/2적억제제U0126화JNK적억제제SP600125대LPS개도적Lp-PLA2단백표체적증가몰유영향.결론 재배양적인외주혈단핵거서세포중,신벌타정가이명현억제LPS유도적Lp-PLA2 mRNA화단백표체,강저Lp-PLA2매활성,해작용지소부분유억제p38MAPK신호전도통로개도.
Objective To investigate the effects of simvastatin on lipopolysaccharides (LPS)induced upregulation of Lp-PLA2 in human peripheral blood monocytes-macrophages and the related mechanisms. Methods Peripheral blood monocytes of healthy volunteer were isolated and incubated for 2-3 days. Monocytes were incubated with various concentrations of LPS for 6 h or with 1 μg/ml of LPS for different times in LPS group. In simvastatin group and MAPK inhibitors groups, cells were pre-treated with simvastatin ( 10-2 - 10-7mmol/L)or various MAPK inhibitors ( 10 μmol/L SB203580, 20 μmol/L U0126,and 20 μmol/L SP600125) before LPS co-incubation. Lp-PLA2 activity was measured by chromometry, LpPLA2 mRNA expression was detected by RT-PCR. Protein expressions of Lp-PLA2 and p38MAPK and phosphorylated p38MAPK were examined by Western blot. Results ( 1 ) LPS significantly upregulated LpPLA2 mRNA and protein expression, as well as the enzyme activity in a time and concentration dependentmanner, which could be significantly attenuated by simvastatin in a time and concentration dependent manner. (2) Simvastatin significantly reduced LPS-induced p38MAPK phosphorylation. The p38 MAPK inhibitor SB203580, but not MEK1/2 inhibitor U0126 and JNK inhibitor SP600125, completely prevented LPS-mediated up-regulation of Lp-PLA2 at protein level. Conclusion This study demonstrated that LPS significantly upregulated Lp-PLA2 mRNA and protein expression, as well as the enzyme activity in a time and concentration dependent manner via Rho-p38MAPK pathway, which could be significantly suppressed by simvastatin.
