中华实验外科杂志
中華實驗外科雜誌
중화실험외과잡지
CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL SURGERY
2006年
1期
49-51
,共3页
温济民%钟宇华%孙芸%于春梅%吴全理
溫濟民%鐘宇華%孫蕓%于春梅%吳全理
온제민%종우화%손예%우춘매%오전리
甲状旁腺激素%细胞转染%甲状旁腺功能低下症%基因治疗
甲狀徬腺激素%細胞轉染%甲狀徬腺功能低下癥%基因治療
갑상방선격소%세포전염%갑상방선공능저하증%기인치료
目的观察甲状旁腺激素(PTH)基因和蛋白体外表达情况,并评价其基因治疗甲状旁腺功能低下模型鼠的作用.方法(1)以脂质体将质粒pcDPG分别1次和多次转染293细胞,观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达并计算转染率;(2)转染24、48、72和96 h后real-time定量PCR和Western blot法检测PTH基因与蛋白表达,并活性鉴定;(3)建立甲状旁腺功能低下症模型,将pcDPG质粒多次肌肉注射治疗,监测血钙和PTH值、存活时间及各器官病理变化.结果转染后24 h即见GFP表达,72 h达高峰,96 h开始减少;多次转染后GFP表达率可达90%以上;PTH cD-NA拷贝数转染24 h为5×103,72 h达最高为8×104,多次转染显著增高(P＜0.01);Western blot 见48 h和72 h有PTH蛋白表达,其可对抗甲状旁腺切除小鼠抽搐症状;术后第2天血钙与PTH明显低于术前(P＜0.05),pcDPG质粒大、中剂量组连续治疗48 h后血钙与PTH值均恢复正常.结论重组PTH基因治疗甲状旁腺功能低下模型鼠有较好的疗效.
目的觀察甲狀徬腺激素(PTH)基因和蛋白體外錶達情況,併評價其基因治療甲狀徬腺功能低下模型鼠的作用.方法(1)以脂質體將質粒pcDPG分彆1次和多次轉染293細胞,觀察綠色熒光蛋白(GFP)的錶達併計算轉染率;(2)轉染24、48、72和96 h後real-time定量PCR和Western blot法檢測PTH基因與蛋白錶達,併活性鑒定;(3)建立甲狀徬腺功能低下癥模型,將pcDPG質粒多次肌肉註射治療,鑑測血鈣和PTH值、存活時間及各器官病理變化.結果轉染後24 h即見GFP錶達,72 h達高峰,96 h開始減少;多次轉染後GFP錶達率可達90%以上;PTH cD-NA拷貝數轉染24 h為5×103,72 h達最高為8×104,多次轉染顯著增高(P＜0.01);Western blot 見48 h和72 h有PTH蛋白錶達,其可對抗甲狀徬腺切除小鼠抽搐癥狀;術後第2天血鈣與PTH明顯低于術前(P＜0.05),pcDPG質粒大、中劑量組連續治療48 h後血鈣與PTH值均恢複正常.結論重組PTH基因治療甲狀徬腺功能低下模型鼠有較好的療效.
목적관찰갑상방선격소(PTH)기인화단백체외표체정황,병평개기기인치료갑상방선공능저하모형서적작용.방법(1)이지질체장질립pcDPG분별1차화다차전염293세포,관찰록색형광단백(GFP)적표체병계산전염솔;(2)전염24、48、72화96 h후real-time정량PCR화Western blot법검측PTH기인여단백표체,병활성감정;(3)건립갑상방선공능저하증모형,장pcDPG질립다차기육주사치료,감측혈개화PTH치、존활시간급각기관병리변화.결과전염후24 h즉견GFP표체,72 h체고봉,96 h개시감소;다차전염후GFP표체솔가체90%이상;PTH cD-NA고패수전염24 h위5×103,72 h체최고위8×104,다차전염현저증고(P＜0.01);Western blot 견48 h화72 h유PTH단백표체,기가대항갑상방선절제소서추휵증상;술후제2천혈개여PTH명현저우술전(P＜0.05),pcDPG질립대、중제량조련속치료48 h후혈개여PTH치균회복정상.결론중조PTH기인치료갑상방선공능저하모형서유교호적료효.
