中华医学杂志
中華醫學雜誌
중화의학잡지
National Medical Journal of China
2007年
9期
627-633
,共7页
刘叶%范顺武%丁佳逸%赵兴%沈炜亮
劉葉%範順武%丁佳逸%趙興%瀋煒亮
류협%범순무%정가일%조흥%침위량
骨肉瘤%RNA%细胞周期蛋白A
骨肉瘤%RNA%細胞週期蛋白A
골육류%RNA%세포주기단백A
目的 研究siRNA对骨肉瘤MG-63细胞株及正常成纤维细胞细胞周期蛋白cyclin A2基因表达的抑制及对细胞增殖的影响.方法 设计并化学合成靶向cyclinA2基因的siRNA,用oligofectamine将其转染到骨肉瘤细胞系MG-63及正常人成纤维细胞(HSF)中,用无义siRNA转染作为阴性对照,以单加缓冲液磷酸盐缓冲液(PBS)作为空白对照,实时-聚合酶链反应(PCR)、Western印迹方法检测cyclinA2基因沉默效果,采用MTT、RT-PCR、流式细胞、平板克隆培养等方法评价cyclinA2基因表达后被抑制后细胞的生长状态,同时检测细胞PCNA及cyclinB1基因表达的改变.结果 1、10、50、100 nmol/L浓度的cyclinA2-siRNA分别使MG-63细胞cyclinA2基因表达降低了9.4%,56.4%,79.2%和84.3%,同时cyclinA2蛋白表达也相应降低.转染10 nmol/L及50 nmol/L siRNA后48 h,MG-63细胞增殖抑制分别达到39.1%及54.9%,细胞周期阻滞于G0/G1期,平板克隆形成率降低,细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)及cyclinB1的mRNA表达水平明显下降.对正常成纤维细胞HSF,50 nmol/L cyclinA2-siRNA可抑制58.1%的cyclinA2基因及蛋白表达,其导致细胞周期出现轻度改变,但细胞的增殖及平板克隆形成能力未受影响.结论 cyclinA2是肿瘤细胞增殖所依赖的关键基因,针对cyclinA2基因的siRNA能有效降低细胞中cyclinA2 mRNA及蛋白的表达,其能抑制骨肉瘤细胞的生长而对正常细胞的增殖影响很小,靶向cyclinA2的siRNA有望成为治疗骨肉瘤的新途径.
目的 研究siRNA對骨肉瘤MG-63細胞株及正常成纖維細胞細胞週期蛋白cyclin A2基因錶達的抑製及對細胞增殖的影響.方法 設計併化學閤成靶嚮cyclinA2基因的siRNA,用oligofectamine將其轉染到骨肉瘤細胞繫MG-63及正常人成纖維細胞(HSF)中,用無義siRNA轉染作為陰性對照,以單加緩遲液燐痠鹽緩遲液(PBS)作為空白對照,實時-聚閤酶鏈反應(PCR)、Western印跡方法檢測cyclinA2基因沉默效果,採用MTT、RT-PCR、流式細胞、平闆剋隆培養等方法評價cyclinA2基因錶達後被抑製後細胞的生長狀態,同時檢測細胞PCNA及cyclinB1基因錶達的改變.結果 1、10、50、100 nmol/L濃度的cyclinA2-siRNA分彆使MG-63細胞cyclinA2基因錶達降低瞭9.4%,56.4%,79.2%和84.3%,同時cyclinA2蛋白錶達也相應降低.轉染10 nmol/L及50 nmol/L siRNA後48 h,MG-63細胞增殖抑製分彆達到39.1%及54.9%,細胞週期阻滯于G0/G1期,平闆剋隆形成率降低,細胞中增殖細胞覈抗原(PCNA)及cyclinB1的mRNA錶達水平明顯下降.對正常成纖維細胞HSF,50 nmol/L cyclinA2-siRNA可抑製58.1%的cyclinA2基因及蛋白錶達,其導緻細胞週期齣現輕度改變,但細胞的增殖及平闆剋隆形成能力未受影響.結論 cyclinA2是腫瘤細胞增殖所依賴的關鍵基因,針對cyclinA2基因的siRNA能有效降低細胞中cyclinA2 mRNA及蛋白的錶達,其能抑製骨肉瘤細胞的生長而對正常細胞的增殖影響很小,靶嚮cyclinA2的siRNA有望成為治療骨肉瘤的新途徑.
목적 연구siRNA대골육류MG-63세포주급정상성섬유세포세포주기단백cyclin A2기인표체적억제급대세포증식적영향.방법 설계병화학합성파향cyclinA2기인적siRNA,용oligofectamine장기전염도골육류세포계MG-63급정상인성섬유세포(HSF)중,용무의siRNA전염작위음성대조,이단가완충액린산염완충액(PBS)작위공백대조,실시-취합매련반응(PCR)、Western인적방법검측cyclinA2기인침묵효과,채용MTT、RT-PCR、류식세포、평판극륭배양등방법평개cyclinA2기인표체후피억제후세포적생장상태,동시검측세포PCNA급cyclinB1기인표체적개변.결과 1、10、50、100 nmol/L농도적cyclinA2-siRNA분별사MG-63세포cyclinA2기인표체강저료9.4%,56.4%,79.2%화84.3%,동시cyclinA2단백표체야상응강저.전염10 nmol/L급50 nmol/L siRNA후48 h,MG-63세포증식억제분별체도39.1%급54.9%,세포주기조체우G0/G1기,평판극륭형성솔강저,세포중증식세포핵항원(PCNA)급cyclinB1적mRNA표체수평명현하강.대정상성섬유세포HSF,50 nmol/L cyclinA2-siRNA가억제58.1%적cyclinA2기인급단백표체,기도치세포주기출현경도개변,단세포적증식급평판극륭형성능력미수영향.결론 cyclinA2시종류세포증식소의뢰적관건기인,침대cyclinA2기인적siRNA능유효강저세포중cyclinA2 mRNA급단백적표체,기능억제골육류세포적생장이대정상세포적증식영향흔소,파향cyclinA2적siRNA유망성위치료골육류적신도경.
