生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2004年
1期
23-25
,共3页
张锐%孙美榕%欧阳红生%张玉静
張銳%孫美榕%歐暘紅生%張玉靜
장예%손미용%구양홍생%장옥정
猪肌生成抑制素%成熟蛋白编码序列%表达%纯化
豬肌生成抑製素%成熟蛋白編碼序列%錶達%純化
저기생성억제소%성숙단백편마서렬%표체%순화
猪肌生成抑制素(myostatin,MSTN)基因的cDNA去除信号肽后PCR扩增出成熟蛋白编码序列1.2kb片段,将该片段与pMD18-T载体连接,转化JM109受体菌细胞;筛选阳性克隆测序分析,结果表明与设计序列完全一致.将该克隆载体的质粒DNA用带有BamHI和SalI内切酶识别序列的另一对引物进行PCR扩增,将回收的1.2kbPCR目的片段定向克隆到pET28a(+)表达载体上,成功地构建了编码猪肌生成抑制素成熟蛋白的原核表达载体.LB液体培养基中用IPTG诱导表达,SDS-pAGE显示重组菌表达的MSTN蛋白以包涵体形式存在;经薄层扫描仪扫描分析SDS-PAGE凝胶,表达的MSTN包涵体蛋白占菌体不溶性蛋白含量的27.9%,其相对分子质量为41 451.3.所构建的表达载体中含六聚组氨酸标签,HisTrap亲和柱纯化后纯度可达92.5%.该试验为获得较好的猪肌生成抑制素并制备抗体打下了良好的基础.
豬肌生成抑製素(myostatin,MSTN)基因的cDNA去除信號肽後PCR擴增齣成熟蛋白編碼序列1.2kb片段,將該片段與pMD18-T載體連接,轉化JM109受體菌細胞;篩選暘性剋隆測序分析,結果錶明與設計序列完全一緻.將該剋隆載體的質粒DNA用帶有BamHI和SalI內切酶識彆序列的另一對引物進行PCR擴增,將迴收的1.2kbPCR目的片段定嚮剋隆到pET28a(+)錶達載體上,成功地構建瞭編碼豬肌生成抑製素成熟蛋白的原覈錶達載體.LB液體培養基中用IPTG誘導錶達,SDS-pAGE顯示重組菌錶達的MSTN蛋白以包涵體形式存在;經薄層掃描儀掃描分析SDS-PAGE凝膠,錶達的MSTN包涵體蛋白佔菌體不溶性蛋白含量的27.9%,其相對分子質量為41 451.3.所構建的錶達載體中含六聚組氨痠標籤,HisTrap親和柱純化後純度可達92.5%.該試驗為穫得較好的豬肌生成抑製素併製備抗體打下瞭良好的基礎.
저기생성억제소(myostatin,MSTN)기인적cDNA거제신호태후PCR확증출성숙단백편마서렬1.2kb편단,장해편단여pMD18-T재체련접,전화JM109수체균세포;사선양성극륭측서분석,결과표명여설계서렬완전일치.장해극륭재체적질립DNA용대유BamHI화SalI내절매식별서렬적령일대인물진행PCR확증,장회수적1.2kbPCR목적편단정향극륭도pET28a(+)표체재체상,성공지구건료편마저기생성억제소성숙단백적원핵표체재체.LB액체배양기중용IPTG유도표체,SDS-pAGE현시중조균표체적MSTN단백이포함체형식존재;경박층소묘의소묘분석SDS-PAGE응효,표체적MSTN포함체단백점균체불용성단백함량적27.9%,기상대분자질량위41 451.3.소구건적표체재체중함륙취조안산표첨,HisTrap친화주순화후순도가체92.5%.해시험위획득교호적저기생성억제소병제비항체타하료량호적기출.
