安徽农业科学
安徽農業科學
안휘농업과학
JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL SCIENCES
2009年
15期
6876-6878
,共3页
口蹄疫病毒%VP1基因%原核表达%蛋白复性
口蹄疫病毒%VP1基因%原覈錶達%蛋白複性
구제역병독%VP1기인%원핵표체%단백복성
以0型FMDV重组质粒pMD18T-O-VP1为模板,利用PCR技术扩增得到O型FMDV-VO1基因片段,将此基因片段与原核表达载体pET32a连接构建重组表达载体pET32a-O-VP1,经PCR和测序鉴定后,用IPTG诱导VP1基因的表达,收集不同诱导时间的菌液,进行SDSPAGE电泳,摸索掌握最佳诱导时间,切取最佳诱导时间电泳胶片做Western-blotting,分析检验表达产物与其抗血清的反应性.结果显示,分子量约为45 ku的蛋白条带反应显著,能被口蹄疫阳性血清识别,表明FMDV-VP1基因在大肠杆菌中得到高效表达,纯化复性的表达蛋白有望开发为诊断抗原和多肽疫苗.
以0型FMDV重組質粒pMD18T-O-VP1為模闆,利用PCR技術擴增得到O型FMDV-VO1基因片段,將此基因片段與原覈錶達載體pET32a連接構建重組錶達載體pET32a-O-VP1,經PCR和測序鑒定後,用IPTG誘導VP1基因的錶達,收集不同誘導時間的菌液,進行SDSPAGE電泳,摸索掌握最佳誘導時間,切取最佳誘導時間電泳膠片做Western-blotting,分析檢驗錶達產物與其抗血清的反應性.結果顯示,分子量約為45 ku的蛋白條帶反應顯著,能被口蹄疫暘性血清識彆,錶明FMDV-VP1基因在大腸桿菌中得到高效錶達,純化複性的錶達蛋白有望開髮為診斷抗原和多肽疫苗.
이0형FMDV중조질립pMD18T-O-VP1위모판,이용PCR기술확증득도O형FMDV-VO1기인편단,장차기인편단여원핵표체재체pET32a련접구건중조표체재체pET32a-O-VP1,경PCR화측서감정후,용IPTG유도VP1기인적표체,수집불동유도시간적균액,진행SDSPAGE전영,모색장악최가유도시간,절취최가유도시간전영효편주Western-blotting,분석검험표체산물여기항혈청적반응성.결과현시,분자량약위45 ku적단백조대반응현저,능피구제역양성혈청식별,표명FMDV-VP1기인재대장간균중득도고효표체,순화복성적표체단백유망개발위진단항원화다태역묘.
