生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2004年
5期
673-678
,共6页
熊冬生%郑梦杰%刘银星%许元富%王金红%杨纯正
熊鼕生%鄭夢傑%劉銀星%許元富%王金紅%楊純正
웅동생%정몽걸%류은성%허원부%왕금홍%양순정
嵌和抗体%发酵%CD20%凋亡%B细胞淋巴瘤
嵌和抗體%髮酵%CD20%凋亡%B細胞淋巴瘤
감화항체%발효%CD20%조망%B세포림파류
构建抗CD20嵌合抗体片段F(ab′)2突变体,研究其在大肠杆菌中的高效表达及其表达产物的生物学活性.采用PCR法构建抗CD20嵌合抗体片段F(ab′)2突变体,并用双脱氧终止法测定DNA序列;采用19L发酵罐高密度发酵抗CD20嵌合抗体片段F(ab′)2突变体,采用亲和色谱和分子筛色谱法纯化表达产物,并用SDS-PAGE和薄层激光扫描鉴定纯化产物;采用活细胞间接免疫荧光法测定纯化产物与靶细胞的结合活性;MTT法测定纯化产物对Raji细胞的生长抑制作用,并研究其作用机理.DNA序列测定结果表明,抗CD20嵌合抗体片段F(ab′)2突变体已成功构建,表达可溶性产物的产量达360 mg/L,具有与Raji细胞(CD20+)结合的活性,并抑制Raji细胞的生长,其作用机理为诱导Raji细胞凋亡.此突变体有望成为治疗非何杰金氏B细胞淋巴瘤的药物.
構建抗CD20嵌閤抗體片段F(ab′)2突變體,研究其在大腸桿菌中的高效錶達及其錶達產物的生物學活性.採用PCR法構建抗CD20嵌閤抗體片段F(ab′)2突變體,併用雙脫氧終止法測定DNA序列;採用19L髮酵罐高密度髮酵抗CD20嵌閤抗體片段F(ab′)2突變體,採用親和色譜和分子篩色譜法純化錶達產物,併用SDS-PAGE和薄層激光掃描鑒定純化產物;採用活細胞間接免疫熒光法測定純化產物與靶細胞的結閤活性;MTT法測定純化產物對Raji細胞的生長抑製作用,併研究其作用機理.DNA序列測定結果錶明,抗CD20嵌閤抗體片段F(ab′)2突變體已成功構建,錶達可溶性產物的產量達360 mg/L,具有與Raji細胞(CD20+)結閤的活性,併抑製Raji細胞的生長,其作用機理為誘導Raji細胞凋亡.此突變體有望成為治療非何傑金氏B細胞淋巴瘤的藥物.
구건항CD20감합항체편단F(ab′)2돌변체,연구기재대장간균중적고효표체급기표체산물적생물학활성.채용PCR법구건항CD20감합항체편단F(ab′)2돌변체,병용쌍탈양종지법측정DNA서렬;채용19L발효관고밀도발효항CD20감합항체편단F(ab′)2돌변체,채용친화색보화분자사색보법순화표체산물,병용SDS-PAGE화박층격광소묘감정순화산물;채용활세포간접면역형광법측정순화산물여파세포적결합활성;MTT법측정순화산물대Raji세포적생장억제작용,병연구기작용궤리.DNA서렬측정결과표명,항CD20감합항체편단F(ab′)2돌변체이성공구건,표체가용성산물적산량체360 mg/L,구유여Raji세포(CD20+)결합적활성,병억제Raji세포적생장,기작용궤리위유도Raji세포조망.차돌변체유망성위치료비하걸금씨B세포림파류적약물.
