浙江大学学报（医学版）
浙江大學學報（醫學版）
절강대학학보（의학판）
JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY MEDICAL SCIENCES
2006年
5期
507-511
,共5页
侯伟%沃健儿%刘克洲%李敏伟
侯偉%沃健兒%劉剋洲%李敏偉
후위%옥건인%류극주%리민위
DNA催化性%DNA%单es,链%肝炎病毒,乙型/遗传学%基因组,病毒/遗传学%重组,遗传%转染
DNA催化性%DNA%單es,鏈%肝炎病毒,乙型/遺傳學%基因組,病毒/遺傳學%重組,遺傳%轉染
DNA최화성%DNA%단es,련%간염병독,을형/유전학%기인조,병독/유전학%중조,유전%전염
目的:探讨10-23 DNA enzyme对乙型肝炎病毒C基因体外转录产物的特异切割活性.方法:设计并合成3种能针对乙型肝炎病毒C基因开放阅读框A1816UG的特异性脱氧核酶,分别命名为DrzBC-7、DrzBC-8和DrzBC-9.应用体外转录的方法获得相应的底物RNA,观察DrzBC-7、DrzBC-8和DrzBC-9对其的体外切割效应.以DrzBC-9为例,观察不同浓度的MgCl2对体外切割效率的影响,根据Lineweaver Burk作图法,计算相关的酶动力学参数Km、Kcat和Kcat/Km.结果:通过体外转录获得用于切割反应的底物RNA,其大小为300 nt.在特定的切割条件下,DrzBC-7、DrzBC-8和DrzBC-9均能对相应的底物RNA进行有效的切割,切割产物分别为109 nt和191 nt.以DrzBC-9为例,在切割反应体系中缺乏MgCl2时,未见有切割反应.MgCl2浓度在150 mmol·L-1时达到最高切割效率,再提高MgCl2的浓度,切割效率未见明显增大.酶动力学参数Km、Kcat和Kcat/Km分别为1.4×10-9 mol·L-1,1.6 min-1和 1.1×109 mol·L-1·min-1.结论:针对乙型肝炎病毒C基因的10-23 DNA enzyme在体外对相应的转录产物有特异切割作用.
目的:探討10-23 DNA enzyme對乙型肝炎病毒C基因體外轉錄產物的特異切割活性.方法:設計併閤成3種能針對乙型肝炎病毒C基因開放閱讀框A1816UG的特異性脫氧覈酶,分彆命名為DrzBC-7、DrzBC-8和DrzBC-9.應用體外轉錄的方法穫得相應的底物RNA,觀察DrzBC-7、DrzBC-8和DrzBC-9對其的體外切割效應.以DrzBC-9為例,觀察不同濃度的MgCl2對體外切割效率的影響,根據Lineweaver Burk作圖法,計算相關的酶動力學參數Km、Kcat和Kcat/Km.結果:通過體外轉錄穫得用于切割反應的底物RNA,其大小為300 nt.在特定的切割條件下,DrzBC-7、DrzBC-8和DrzBC-9均能對相應的底物RNA進行有效的切割,切割產物分彆為109 nt和191 nt.以DrzBC-9為例,在切割反應體繫中缺乏MgCl2時,未見有切割反應.MgCl2濃度在150 mmol·L-1時達到最高切割效率,再提高MgCl2的濃度,切割效率未見明顯增大.酶動力學參數Km、Kcat和Kcat/Km分彆為1.4×10-9 mol·L-1,1.6 min-1和 1.1×109 mol·L-1·min-1.結論:針對乙型肝炎病毒C基因的10-23 DNA enzyme在體外對相應的轉錄產物有特異切割作用.
목적:탐토10-23 DNA enzyme대을형간염병독C기인체외전록산물적특이절할활성.방법:설계병합성3충능침대을형간염병독C기인개방열독광A1816UG적특이성탈양핵매,분별명명위DrzBC-7、DrzBC-8화DrzBC-9.응용체외전록적방법획득상응적저물RNA,관찰DrzBC-7、DrzBC-8화DrzBC-9대기적체외절할효응.이DrzBC-9위례,관찰불동농도적MgCl2대체외절할효솔적영향,근거Lineweaver Burk작도법,계산상관적매동역학삼수Km、Kcat화Kcat/Km.결과:통과체외전록획득용우절할반응적저물RNA,기대소위300 nt.재특정적절할조건하,DrzBC-7、DrzBC-8화DrzBC-9균능대상응적저물RNA진행유효적절할,절할산물분별위109 nt화191 nt.이DrzBC-9위례,재절할반응체계중결핍MgCl2시,미견유절할반응.MgCl2농도재150 mmol·L-1시체도최고절할효솔,재제고MgCl2적농도,절할효솔미견명현증대.매동역학삼수Km、Kcat화Kcat/Km분별위1.4×10-9 mol·L-1,1.6 min-1화 1.1×109 mol·L-1·min-1.결론:침대을형간염병독C기인적10-23 DNA enzyme재체외대상응적전록산물유특이절할작용.
