中国生物制品学杂志
中國生物製品學雜誌
중국생물제품학잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
2008年
1期
19-22
,共4页
陈永胜%刘长江%邵敬伟%李长彪
陳永勝%劉長江%邵敬偉%李長彪
진영성%류장강%소경위%리장표
甘油脱水酶%α亚基%克隆%表达%纯化%活性
甘油脫水酶%α亞基%剋隆%錶達%純化%活性
감유탈수매%α아기%극륭%표체%순화%활성
目的 克隆甘油脱水酶α亚基基因,构建表达载体,表达并纯化融合蛋白.方法 采用PCR技术克隆甘油脱水酶α亚基gldA基因,并将其重组到含组氨酸标签的表达质粒pET-32a(+)中.将重组质粒经热激转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达.表达产物经金属螯合层析柱纯化,并进行Western blot分析及活性检测.结果 重组表达质粒pET/gldA经酶切鉴定及序列分析,证明构建正确.转化E.coli BL21(DE3)后,重组蛋白获得可溶性表达,融合蛋白相对分子质量约81 000,与预期大小一致.经Western blot分析,纯化蛋白能与6-Histidine抗体产生特异性免疫反应.α亚基经检测,未显示活性.结论 已成功获得甘油脱水酶α亚基蛋白,为进一步研究其生物学性能奠定了基础.
目的 剋隆甘油脫水酶α亞基基因,構建錶達載體,錶達併純化融閤蛋白.方法 採用PCR技術剋隆甘油脫水酶α亞基gldA基因,併將其重組到含組氨痠標籤的錶達質粒pET-32a(+)中.將重組質粒經熱激轉化至大腸桿菌BL21(DE3)中,IPTG誘導錶達.錶達產物經金屬螯閤層析柱純化,併進行Western blot分析及活性檢測.結果 重組錶達質粒pET/gldA經酶切鑒定及序列分析,證明構建正確.轉化E.coli BL21(DE3)後,重組蛋白穫得可溶性錶達,融閤蛋白相對分子質量約81 000,與預期大小一緻.經Western blot分析,純化蛋白能與6-Histidine抗體產生特異性免疫反應.α亞基經檢測,未顯示活性.結論 已成功穫得甘油脫水酶α亞基蛋白,為進一步研究其生物學性能奠定瞭基礎.
목적 극륭감유탈수매α아기기인,구건표체재체,표체병순화융합단백.방법 채용PCR기술극륭감유탈수매α아기gldA기인,병장기중조도함조안산표첨적표체질립pET-32a(+)중.장중조질립경열격전화지대장간균BL21(DE3)중,IPTG유도표체.표체산물경금속오합층석주순화,병진행Western blot분석급활성검측.결과 중조표체질립pET/gldA경매절감정급서렬분석,증명구건정학.전화E.coli BL21(DE3)후,중조단백획득가용성표체,융합단백상대분자질량약81 000,여예기대소일치.경Western blot분석,순화단백능여6-Histidine항체산생특이성면역반응.α아기경검측,미현시활성.결론 이성공획득감유탈수매α아기단백,위진일보연구기생물학성능전정료기출.
