北京大学学报（医学版）
北京大學學報（醫學版）
북경대학학보（의학판）
JOURNAL OF BEIJING MEDICAL UNIVERSITY(HEALTH SCIENCES)
2012年
3期
475-480
,共6页
余日月%曾百进%刘云松%周永胜
餘日月%曾百進%劉雲鬆%週永勝
여일월%증백진%류운송%주영성
脂肪组织%间质细胞%骨生成%肿瘤坏死因子α
脂肪組織%間質細胞%骨生成%腫瘤壞死因子α
지방조직%간질세포%골생성%종류배사인자α
目的:探讨一定浓度的重组人肿瘤坏死因子α( recombinant human tumor necrosis factor alpha,rhTNF-α)对人脂肪基质细胞(human adipose-derived stromal cells,hASCs)体外成骨向分化的影响.方法:采用第4代hASCs,根据培养基的不同分为4组:(1)基础培养[DMEM+10％ FBS(体积分数)+100 U/mL青霉素+100 mg/L链霉素]；(2)基础培养+ 10 μg/L r(b)TNF-α；(3)成骨向诱导培养(基础培养+100 nmoL/L地塞米松+50 μmol/L维生素C+ 10 mmol/L β-甘油磷酸)；(4)成骨向诱导培养+10 μg/L rhTNF-α.各组每3天更换相应培养基.在第3、7、14天和第21天进行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)定量检测；在第14和21天进行钙结节染色和矿化沉积定量检测；并用反转录PCR检测成骨向诱导组核心结合因子α1( core-binding factor α1,Cbfa1)、Osterix(Osx)和骨钙素( osteocalcin,OC)等成骨相关基因的表达；在成骨向诱导的第3天,用实时定量PCR检测rhTNF-α对hASCs成骨相关基因表达的影响.结果:对碱性磷酸酶定量检测,在成骨向诱导的第14天(3.527±0.415 vs.2.345±0.354,P＜0.01)和第21天(3.106±0.105 vs.2.442±0.163,P＜0.01),10 μg/L的rhTNF-α可以促进其表达；同样对于矿化沉积检测,在成骨向诱导的第14天(2.896±0.173 vs.0.679±0.173,P＜0.01)和第21天(2.231±0.233vs 1.729±0.229,P＜0.01),10 μg/L的rhTNF-α也促进其表达；反转录PCR和实时定量PCR也表明rhTNF-α可以促进Cbfal,Osx和OC的表达.结论:10 μg/L的rhTNF-α可以促进成骨向诱导的hASCs体外成骨向分化,并可以促进成骨相关基因Cbfa1、Osx和OC的表达.
目的:探討一定濃度的重組人腫瘤壞死因子α( recombinant human tumor necrosis factor alpha,rhTNF-α)對人脂肪基質細胞(human adipose-derived stromal cells,hASCs)體外成骨嚮分化的影響.方法:採用第4代hASCs,根據培養基的不同分為4組:(1)基礎培養[DMEM+10％ FBS(體積分數)+100 U/mL青黴素+100 mg/L鏈黴素]；(2)基礎培養+ 10 μg/L r(b)TNF-α；(3)成骨嚮誘導培養(基礎培養+100 nmoL/L地塞米鬆+50 μmol/L維生素C+ 10 mmol/L β-甘油燐痠)；(4)成骨嚮誘導培養+10 μg/L rhTNF-α.各組每3天更換相應培養基.在第3、7、14天和第21天進行堿性燐痠酶(alkaline phosphatase,ALP)定量檢測；在第14和21天進行鈣結節染色和礦化沉積定量檢測；併用反轉錄PCR檢測成骨嚮誘導組覈心結閤因子α1( core-binding factor α1,Cbfa1)、Osterix(Osx)和骨鈣素( osteocalcin,OC)等成骨相關基因的錶達；在成骨嚮誘導的第3天,用實時定量PCR檢測rhTNF-α對hASCs成骨相關基因錶達的影響.結果:對堿性燐痠酶定量檢測,在成骨嚮誘導的第14天(3.527±0.415 vs.2.345±0.354,P＜0.01)和第21天(3.106±0.105 vs.2.442±0.163,P＜0.01),10 μg/L的rhTNF-α可以促進其錶達；同樣對于礦化沉積檢測,在成骨嚮誘導的第14天(2.896±0.173 vs.0.679±0.173,P＜0.01)和第21天(2.231±0.233vs 1.729±0.229,P＜0.01),10 μg/L的rhTNF-α也促進其錶達；反轉錄PCR和實時定量PCR也錶明rhTNF-α可以促進Cbfal,Osx和OC的錶達.結論:10 μg/L的rhTNF-α可以促進成骨嚮誘導的hASCs體外成骨嚮分化,併可以促進成骨相關基因Cbfa1、Osx和OC的錶達.
목적:탐토일정농도적중조인종류배사인자α( recombinant human tumor necrosis factor alpha,rhTNF-α)대인지방기질세포(human adipose-derived stromal cells,hASCs)체외성골향분화적영향.방법:채용제4대hASCs,근거배양기적불동분위4조:(1)기출배양[DMEM+10％ FBS(체적분수)+100 U/mL청매소+100 mg/L련매소]；(2)기출배양+ 10 μg/L r(b)TNF-α；(3)성골향유도배양(기출배양+100 nmoL/L지새미송+50 μmol/L유생소C+ 10 mmol/L β-감유린산)；(4)성골향유도배양+10 μg/L rhTNF-α.각조매3천경환상응배양기.재제3、7、14천화제21천진행감성린산매(alkaline phosphatase,ALP)정량검측；재제14화21천진행개결절염색화광화침적정량검측；병용반전록PCR검측성골향유도조핵심결합인자α1( core-binding factor α1,Cbfa1)、Osterix(Osx)화골개소( osteocalcin,OC)등성골상관기인적표체；재성골향유도적제3천,용실시정량PCR검측rhTNF-α대hASCs성골상관기인표체적영향.결과:대감성린산매정량검측,재성골향유도적제14천(3.527±0.415 vs.2.345±0.354,P＜0.01)화제21천(3.106±0.105 vs.2.442±0.163,P＜0.01),10 μg/L적rhTNF-α가이촉진기표체；동양대우광화침적검측,재성골향유도적제14천(2.896±0.173 vs.0.679±0.173,P＜0.01)화제21천(2.231±0.233vs 1.729±0.229,P＜0.01),10 μg/L적rhTNF-α야촉진기표체；반전록PCR화실시정량PCR야표명rhTNF-α가이촉진Cbfal,Osx화OC적표체.결론:10 μg/L적rhTNF-α가이촉진성골향유도적hASCs체외성골향분화,병가이촉진성골상관기인Cbfa1、Osx화OC적표체.
