CAJ | 학술논문

目的:探讨强直性脊柱炎(AS)患者骨髓间充质干细胞(BMSCs)的生物学及免疫学特性,为进一步阐明AS的发病机制和寻找新的治疗靶点提供理论依据.方法:选取37例活动期AS患者(AS组),男34例,女3例,平均年龄(24.3±5.4)岁,HLA-B27均为阳性;49例健康志愿者作为对照组(HD组),男43例,女6例,平均年龄(25.7±4.9)岁；其中HLA-B27阴性44例(HD1组),HLA-B27阳性5例(HD2组).从每例受检者髂后上棘穿刺采集骨髓组织,分离BMSCs,培养扩增至第3代,以l×l04/ml的浓度接种于96孔板中,100μ,l/孔,从第1天开始每日取3 孔进行细胞计数,共计12d,绘制生长曲线；每日取3孔经MTT处理后测定吸光度值,绘制细胞活力曲线,观察BMSCs的生物学特性.使用流式细胞仪检测各受检者BMSCs的细胞表面表型.将第3代BMSCs细胞接种于U形底96孔板,培养4h后使用60Co照射30Gy;取健康志愿者外周血采用密度梯度法分离单个核细胞(PBMCs),加入细胞培养液,计数后按BMSCs:PBMCs 1∶20、1∶10、1∶5、1∶2、1∶1的比例接种于已接种BMSCs的96孔板,共培养5d,观察双向混合淋巴细胞反应情况;同样获取PBMCs,计数后同样以5个比例接种于96孔板,加入植物血凝素(PHA)4μg/m1,充分接触后共培养5d,观察淋巴细胞增殖反应情况.对组间进行统计学比较.结果:AS组、HD1和HD2组第3代BMSCs体外培养1～12d时的增殖能力、细胞活力无显著性差异(P＞0.05)；三组细胞表面表型均为高水平表达CD105、CD73和CD90,不表达CD45、CD34、CD14和HLA-DR.HD1组和HD2组BMSCs与不同比例PBMCs共培养的双向混合淋巴细胞反应和PHA刺激的淋巴细胞增殖反应均无显著性差异(P＞0.05);AS组与HD组比较有显著性差异(P＜0.05).结论:AS患者BMSCs的生物学特性无明显改变,但其免疫调节功能明显下降,其可能在AS的发病机制中扮演重要角色.
목적:탐토강직성척주염(AS)환자골수간충질간세포(BMSCs)적생물학급면역학특성,위진일보천명AS적발병궤제화심조신적치료파점제공이론의거.방법:선취37례활동기AS환자(AS조),남34례,녀3례,평균년령(24.3±5.4)세,HLA-B27균위양성;49례건강지원자작위대조조(HD조),남43례,녀6례,평균년령(25.7±4.9)세；기중HLA-B27음성44례(HD1조),HLA-B27양성5례(HD2조).종매례수검자가후상극천자채집골수조직,분리BMSCs,배양확증지제3대,이l×l04/ml적농도접충우96공판중,100μ,l/공,종제1천개시매일취3 공진행세포계수,공계12d,회제생장곡선；매일취3공경MTT처리후측정흡광도치,회제세포활력곡선,관찰BMSCs적생물학특성.사용류식세포의검측각수검자BMSCs적세포표면표형.장제3대BMSCs세포접충우U형저96공판,배양4h후사용60Co조사30Gy;취건강지원자외주혈채용밀도제도법분리단개핵세포(PBMCs),가입세포배양액,계수후안BMSCs:PBMCs 1∶20、1∶10、1∶5、1∶2、1∶1적비례접충우이접충BMSCs적96공판,공배양5d,관찰쌍향혼합림파세포반응정황;동양획취PBMCs,계수후동양이5개비례접충우96공판,가입식물혈응소(PHA)4μg/m1,충분접촉후공배양5d,관찰림파세포증식반응정황.대조간진행통계학비교.결과:AS조、HD1화HD2조제3대BMSCs체외배양1～12d시적증식능력、세포활력무현저성차이(P＞0.05)；삼조세포표면표형균위고수평표체CD105、CD73화CD90,불표체CD45、CD34、CD14화HLA-DR.HD1조화HD2조BMSCs여불동비례PBMCs공배양적쌍향혼합림파세포반응화PHA자격적림파세포증식반응균무현저성차이(P＞0.05);AS조여HD조비교유현저성차이(P＜0.05).결론:AS환자BMSCs적생물학특성무명현개변,단기면역조절공능명현하강,기가능재AS적발병궤제중분연중요각색.