预防医学情报杂志
預防醫學情報雜誌
예방의학정보잡지
JOURNAL OF PREVENTIVE MEDICINE INFORMATION
2006年
2期
131-133
,共3页
丁宛琼%杨春%贾文祥%王升启%张再容
丁宛瓊%楊春%賈文祥%王升啟%張再容
정완경%양춘%가문상%왕승계%장재용
肝炎病毒,丙型%转染%体外复制%细胞模型
肝炎病毒,丙型%轉染%體外複製%細胞模型
간염병독,병형%전염%체외복제%세포모형
目的建立HCV体外复制细胞模型.方法用含有生长HCV基因的p90/HCVFL-longp U质粒,转化Sure细胞,36℃摇菌18 h,提取质粒,以线性化DNA为模板,用T7RNA体外转录系统作体外转录,转录产物RNA作RT-PCR、普通琼脂糖凝胶电泳鉴定.采用lipofectin包裹HCVRNA转染生长良好的HepG2细胞.转染48 h后收集细胞,TRIzol提取RNA,分别用正链及负链引物作RT-PCR,确定转染细胞中有无HCV的复制中间体及病毒核酸.作免疫组化确定有无病毒NS3、NS5抗原.结果体外可获得高浓度全长HCV-RNA,但转染未获成功.结论全长HCV-RNA转染细胞模型的建立尚需进一步研究.
目的建立HCV體外複製細胞模型.方法用含有生長HCV基因的p90/HCVFL-longp U質粒,轉化Sure細胞,36℃搖菌18 h,提取質粒,以線性化DNA為模闆,用T7RNA體外轉錄繫統作體外轉錄,轉錄產物RNA作RT-PCR、普通瓊脂糖凝膠電泳鑒定.採用lipofectin包裹HCVRNA轉染生長良好的HepG2細胞.轉染48 h後收集細胞,TRIzol提取RNA,分彆用正鏈及負鏈引物作RT-PCR,確定轉染細胞中有無HCV的複製中間體及病毒覈痠.作免疫組化確定有無病毒NS3、NS5抗原.結果體外可穫得高濃度全長HCV-RNA,但轉染未穫成功.結論全長HCV-RNA轉染細胞模型的建立尚需進一步研究.
목적건립HCV체외복제세포모형.방법용함유생장HCV기인적p90/HCVFL-longp U질립,전화Sure세포,36℃요균18 h,제취질립,이선성화DNA위모판,용T7RNA체외전록계통작체외전록,전록산물RNA작RT-PCR、보통경지당응효전영감정.채용lipofectin포과HCVRNA전염생장량호적HepG2세포.전염48 h후수집세포,TRIzol제취RNA,분별용정련급부련인물작RT-PCR,학정전염세포중유무HCV적복제중간체급병독핵산.작면역조화학정유무병독NS3、NS5항원.결과체외가획득고농도전장HCV-RNA,단전염미획성공.결론전장HCV-RNA전염세포모형적건립상수진일보연구.
