CAJ | 학술논문

中试规模纯化重组人核苷二磷酸激酶A(rhNDPK-A).菌体高压匀浆,然后微滤去除菌体碎片.超滤浓缩,所得样品上样DEAE-sepharose Fast Flow,收集目的峰,上样Cibacron Blue 3GA Sepharose CL4B,含ATP的缓冲液洗脱目的蛋白,超滤精制.结果表明,1500g菌体经过2次匀浆后,所得匀浆液中舍NDPK 47.6g,经过微滤超滤处理后,可回收目的蛋白27.3g.再经过两步柱层析及超滤精制后,最终可得纯度为96.3%的目的蛋白17.2g,总回收率为36.2%,每100 g湿菌体的蛋白产率为1.15g.比较每个步骤的回收率,发现精制＞亲和层析＞离子交换层析＞样品前处理过程.与前期报道发酵工艺联用,rhNDPK-A的纯化产量达到510mg/L.工艺简便、得率高的rhNDPK-A纯化工艺的建立为NDPK的应用开发提供了物质基础;另外,本文结果也提示.对于非分泌型重组蛋白来说,影响目的蛋白回收的最主要因素可能不是柱层析,而是样品前处理过程.
중시규모순화중조인핵감이린산격매A(rhNDPK-A).균체고압균장,연후미려거제균체쇄편.초려농축,소득양품상양DEAE-sepharose Fast Flow,수집목적봉,상양Cibacron Blue 3GA Sepharose CL4B,함ATP적완충액세탈목적단백,초려정제.결과표명,1500g균체경과2차균장후,소득균장액중사NDPK 47.6g,경과미려초려처리후,가회수목적단백27.3g.재경과량보주층석급초려정제후,최종가득순도위96.3%적목적단백17.2g,총회수솔위36.2%,매100 g습균체적단백산솔위1.15g.비교매개보취적회수솔,발현정제＞친화층석＞리자교환층석＞양품전처리과정.여전기보도발효공예련용,rhNDPK-A적순화산량체도510mg/L.공예간편、득솔고적rhNDPK-A순화공예적건립위NDPK적응용개발제공료물질기출;령외,본문결과야제시.대우비분비형중조단백래설,영향목적단백회수적최주요인소가능불시주층석,이시양품전처리과정.