CAJ | 학술논문

E-cadherin是一种重要的肿瘤转移抑制因子,它的功能异常能够导致肿瘤细胞的转移.细胞内成熟的E-cadherin由其前体蛋白剪切而成,目前还没有针对该前体蛋白的特异性抗体.为了得到能用于检测内源性E-cadherin前体蛋白(E-cadherin pre)的抗体,对E-cadherin基因用限制性内切酶Pst I和Pvu II进行双酶切,获取E-cadherin基因的N-端片段,将其重组入原核表达载体pGEX-4T-2中,在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中表达重组蛋白,经谷胱甘肽-琼脂糖珠子纯化后,得到较高纯度的E-cadherin前体抗原.用该抗原免疫新西兰兔,获得抗血清,进一步纯化血清得到抗E-cadherinpre的多克隆抗体.用Western blot检测了外源性和内源性E-cadherin pre,发现该抗体效价高且特异性强;免疫荧光实验表明该抗体可以用于细胞染色,为深入研究E-cadherin pre在细胞内的功能奠定了基础.
E-cadherin시일충중요적종류전이억제인자,타적공능이상능구도치종류세포적전이.세포내성숙적E-cadherin유기전체단백전절이성,목전환몰유침대해전체단백적특이성항체.위료득도능용우검측내원성E-cadherin전체단백(E-cadherin pre)적항체,대E-cadherin기인용한제성내절매Pst I화Pvu II진행쌍매절,획취E-cadherin기인적N-단편단,장기중조입원핵표체재체pGEX-4T-2중,재대장간균BL21(DE3)균주중표체중조단백,경곡광감태-경지당주자순화후,득도교고순도적E-cadherin전체항원.용해항원면역신서란토,획득항혈청,진일보순화혈청득도항E-cadherinpre적다극륭항체.용Western blot검측료외원성화내원성E-cadherin pre,발현해항체효개고차특이성강;면역형광실험표명해항체가이용우세포염색,위심입연구E-cadherin pre재세포내적공능전정료기출.