生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2011年
6期
116-121
,共6页
檀贝贝%孙蕾%张克诚%杨振娟%武哲%张俊
檀貝貝%孫蕾%張剋誠%楊振娟%武哲%張俊
단패패%손뢰%장극성%양진연%무철%장준
武夷菌素%基因组%Fosmid文库%文库探针
武夷菌素%基因組%Fosmid文庫%文庫探針
무이균소%기인조%Fosmid문고%문고탐침
以不吸水链霉菌武夷变种CK-15为材料,提取基因组DNA,经Sau 3A Ⅰ部分酶切后回收35-40 kb之间的片段,连接到pCC1FOS载体上,经过包装转染涂布后构建得到了CK-15基因组的Fosmid文库,文库的滴度为8.8×105CFU/mL.随机挑取16个阳性克隆,经EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切电泳分析,样品插入片段平均长度大于35 kb,插入率为100%,符合构建文库的要求.根据多氧霉素、尼克霉素生物合成基因及大环内酯类聚酮合成酶基因(PKS)设计特异性引物,以基因组为模板进行PCR扩增,筛选特异性引物探针.结果用大环内酯类聚酮合成酶基因设计引物扩增出1 693 bp的片段经Blast比对其与大环内酯类抗生素生物合成基因相似性为95%以上.武夷菌素产生菌CK-15 Fosmid文库的构建及文库探针的获得,为武夷菌素生物合成基因的克隆奠定了基础.
以不吸水鏈黴菌武夷變種CK-15為材料,提取基因組DNA,經Sau 3A Ⅰ部分酶切後迴收35-40 kb之間的片段,連接到pCC1FOS載體上,經過包裝轉染塗佈後構建得到瞭CK-15基因組的Fosmid文庫,文庫的滴度為8.8×105CFU/mL.隨機挑取16箇暘性剋隆,經EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ雙酶切電泳分析,樣品插入片段平均長度大于35 kb,插入率為100%,符閤構建文庫的要求.根據多氧黴素、尼剋黴素生物閤成基因及大環內酯類聚酮閤成酶基因(PKS)設計特異性引物,以基因組為模闆進行PCR擴增,篩選特異性引物探針.結果用大環內酯類聚酮閤成酶基因設計引物擴增齣1 693 bp的片段經Blast比對其與大環內酯類抗生素生物閤成基因相似性為95%以上.武夷菌素產生菌CK-15 Fosmid文庫的構建及文庫探針的穫得,為武夷菌素生物閤成基因的剋隆奠定瞭基礎.
이불흡수련매균무이변충CK-15위재료,제취기인조DNA,경Sau 3A Ⅰ부분매절후회수35-40 kb지간적편단,련접도pCC1FOS재체상,경과포장전염도포후구건득도료CK-15기인조적Fosmid문고,문고적적도위8.8×105CFU/mL.수궤도취16개양성극륭,경EcoR Ⅰ화Hind Ⅲ쌍매절전영분석,양품삽입편단평균장도대우35 kb,삽입솔위100%,부합구건문고적요구.근거다양매소、니극매소생물합성기인급대배내지류취동합성매기인(PKS)설계특이성인물,이기인조위모판진행PCR확증,사선특이성인물탐침.결과용대배내지류취동합성매기인설계인물확증출1 693 bp적편단경Blast비대기여대배내지류항생소생물합성기인상사성위95%이상.무이균소산생균CK-15 Fosmid문고적구건급문고탐침적획득,위무이균소생물합성기인적극륭전정료기출.
