南京林业大学学报（自然科学版）
南京林業大學學報（自然科學版）
남경임업대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF NANJING FORESTRY UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION)
2012年
4期
84-88
,共5页
李国庆%范松%裴建军%赵林果%高树峰
李國慶%範鬆%裴建軍%趙林果%高樹峰
리국경%범송%배건군%조림과%고수봉
外切葡聚糖酶%定点突变%密码子优化%黑曲霉%毕赤酵母
外切葡聚糖酶%定點突變%密碼子優化%黑麯黴%畢赤酵母
외절포취당매%정점돌변%밀마자우화%흑곡매%필적효모
通过NCBI(美国国立生物技术信息中心)对黑曲霉的来源外切葡聚糖酶基因(cb1)的氨基酸序列进行分析,发现其16个活性部位中有6个位点附近的氨基酸为毕赤酵母(Pichia pastoris)表达的稀有密码子.利用反向长距离PCR技术将这些活性位点附近的稀有密码子定点突变为毕赤酵母表达偏爱密码子.将优化后的表达载体pPICZαA-cbh1m转入毕赤酵母KM71H菌株中进行诱导表达.经密码子优化后的cbh1m基因较未优化前cbh1基因的表达量提高了17％.
通過NCBI(美國國立生物技術信息中心)對黑麯黴的來源外切葡聚糖酶基因(cb1)的氨基痠序列進行分析,髮現其16箇活性部位中有6箇位點附近的氨基痠為畢赤酵母(Pichia pastoris)錶達的稀有密碼子.利用反嚮長距離PCR技術將這些活性位點附近的稀有密碼子定點突變為畢赤酵母錶達偏愛密碼子.將優化後的錶達載體pPICZαA-cbh1m轉入畢赤酵母KM71H菌株中進行誘導錶達.經密碼子優化後的cbh1m基因較未優化前cbh1基因的錶達量提高瞭17％.
통과NCBI(미국국립생물기술신식중심)대흑곡매적래원외절포취당매기인(cb1)적안기산서렬진행분석,발현기16개활성부위중유6개위점부근적안기산위필적효모(Pichia pastoris)표체적희유밀마자.이용반향장거리PCR기술장저사활성위점부근적희유밀마자정점돌변위필적효모표체편애밀마자.장우화후적표체재체pPICZαA-cbh1m전입필적효모KM71H균주중진행유도표체.경밀마자우화후적cbh1m기인교미우화전cbh1기인적표체량제고료17％.
